大劣按蚊PPO基因的克隆與抗約氏瘧原蟲感染免疫防御反應的研究.pdf

1、大劣按蚊(Anopheles dirus)是中國和東南亞地區(qū)的重要傳瘧蚊媒,為惡性瘧原蟲的易感蚊種,但可黑化包被中腸內(nèi)發(fā)育的約氏瘧原蟲卵囊并表現(xiàn)出抗性.目前,有關大劣按蚊種傳播惡性瘧原蟲相關的研究較多,但對其抵御瘧原蟲感染的先天性免疫防御機制的研究較少,如黑化包被約氏瘧原蟲卵囊.因此,該課題擬主要進行以下幾方面的基礎研究工作:一、大劣按蚊PPO基因的cDNA克隆與序列分析.二、吸血與約氏瘧原蟲感染對大劣按蚊PPO基因轉(zhuǎn)錄的影響.三、約氏

2、瘧原蟲感染斯氏與大劣按蚊前后其中腸內(nèi)PPO的變化.其實驗內(nèi)容和結(jié)果主要包括以下三個方面:1.根據(jù)岡比亞按蚊、煙草天蛾和天蠶等9種已知昆蟲PPO的保守氨基酸序列設計簡并引物,以大劣按蚊2-3齡幼蟲總RNA為模板進行RT-PCR擴增后獲得一條約600bp的條帶.2.根據(jù)已克隆AdPPO4基因序列設計特異引物,利用半定量RT-PCR分析吸血與約氏瘧原蟲感染對其轉(zhuǎn)錄的影響,并對AdPPO4在蚊各發(fā)育蟲期中的轉(zhuǎn)錄,以及成蚊血淋巴、中腸與唾液腺組織

3、中的轉(zhuǎn)錄進行了研究.3.按蚊中腸既是一個重要的免疫效應器官,也是PPO介導瘧原蟲卵囊黑化包被反應的場所.綜上所述,利用自行設計的PPO基因簡并引物經(jīng)RT-PCR擴增及TA克隆技術成功克隆了大劣按蚊PPO基因部分序列,并在此基礎上初步研究了吸血與約氏瘧原蟲感染對AdPPO4基因轉(zhuǎn)錄的影響.此外,利用PPO多抗并結(jié)合免疫組化與免疫印跡技術分析了約氏瘧原蟲感染斯氏與大劣按蚊前后其中腸PPO的變化.上述工作為以后克隆大劣按蚊PPO基因全序列及研