自發(fā)性高血壓大鼠β1-AR基因甲基化對表達(dá)差異的影響及血壓相關(guān)性研究.pdf

1、目的：1．檢測基因型一致的自發(fā)性高血壓大鼠心肌β1腎上腺素能受體（β1-Adrenergic Receptor,β1-AR）基因啟動子區(qū)是否存在甲基化修飾，探討該基因表達(dá)差異與甲基化的關(guān)系。
　　 2．探討基因型一致的自發(fā)性高血壓大鼠不同個(gè)體β1-AR表達(dá)差異與血壓的關(guān)系。
　　 方法：1．取40只自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensiverats，SHR)，每天14:00-16:00監(jiān)測血壓

2、水平，待血壓穩(wěn)定后記錄收縮壓并處死。
　　 2．采用基因測序方法驗(yàn)證SHRβ1-AR基因型是否一致；提取心肌組織DNA，采用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR，MSP)及亞硫酸鹽測序法檢測β1-AR基因DNA甲基化修飾狀態(tài)，根據(jù)甲基化有無將SHR分為甲基化組與非甲基化組，提取心肌組織RNA，采用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測β1-AR基因mRNA的表達(dá)；用Western blot檢測β1-

3、AR基因蛋白的表達(dá)，比較兩組β1-AR基因表達(dá)差異。
　　 3．根據(jù)血壓水平將SHR分為176-185mmHg組(A組)、186-195mmHg組（B組）、196-205mmHg組(C組)三組。分析三組血壓與β1-AR基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果：1．實(shí)驗(yàn)動物一般情況：共有40只SHR完成實(shí)驗(yàn)，收縮壓、心率、身長、尾長、體重、心重均呈正態(tài)分布，各組SHR心率、身長、尾長、體重、心臟重量比較均無差異(P＞0.05)。

4、>　　 2．生物信息學(xué)分析結(jié)果：對SHRβ1-AR基因測序未檢測到基因突變，基因型一致。甲基化分析顯示大鼠β1-AR基因均存在CpG島，MSP及亞硫酸鹽測序結(jié)果表明SHRβ1-AR基因存在DNA甲基化修飾。
　　 3．甲基化對SHRβ1-AR表達(dá)影響：非甲基化組SHRβ1-ARmRNA表達(dá)量顯著高于甲基化組(110.2±87.5vs.27.8±21.7，P＜0.05)，非甲基化組SHRβ1-AR蛋白表達(dá)量顯著高于甲基化組(0.

5、4±0.1vs.0.2±0.1，P＜0.05)。
　　 4．血壓與SHRβ1-AR表達(dá)關(guān)系：RT-PCR檢測三組SHRβ1-ARmRNA的相對表達(dá)量為：A組為0.21±0.04，B組為0.27±0.02，C組為0.33±0.03；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測三組SHRβ1-ARmRNA的相對表達(dá)量為：A組為25.6±6.4;B組為67.0±15.5;C組為149.3±10.6。蛋白表達(dá)量為0.25±0.08、0.33±0.09、0.4