克霉唑誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細胞CCL229凋亡的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文克霉唑誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細胞CCL229凋亡的實驗研究姓名：趙欣申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：宋今丹2002.3.1腸癌CCL229細胞凋亡的作用，為CLT作為抗腫瘤藥應(yīng)用于臨床提供了進一步的理論依據(jù)。／實驗材料與方法I＼本實驗應(yīng)用培養(yǎng)的高侵襲性人結(jié)腸癌CCL229細胞，檢測克霉唑誘導(dǎo)CCL229細胞凋亡的作用。收集處于對數(shù)生長期的細胞，以105／ml濃度接種細胞，培養(yǎng)24小時待細胞貼壁后給藥。CLT以

2、無水乙醇配成01mol／L貯存液，4。C保存，使用終濃度分別為25／amo]／L，30弘mol／L，35ixmol／L。對照組加入等體積無水乙醇((01％，V／V)，此濃度下乙醇對細胞生長無明顯影響。實驗組每隔48小時換新鮮培養(yǎng)液及CLT。藥物處理不同時間后收集實驗組及對照組細胞。利用熒光顯微鏡、電子顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化，流式細胞儀檢測細胞周期變化及亞二倍體比例，并利用DNA瓊脂糖凝膠電泳及TUNEL法進行凋亡的分子生物學(xué)檢測。實驗

3、結(jié)果濃度分別為25panol／L，30燦mol／L，35lamol／L的CLT作用于體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌細胞CCL229。對照組加入等體積無水乙醇(01％，v／V)。熒光顯微鏡下見AO染色的對照組CCL229細胞核呈黃綠色熒光，染色均勻一致。經(jīng)301amol／LCLT作用后可見胞核固縮，染色質(zhì)高度濃縮凝聚，分塊成亮黃色熒光。凋亡嚴重時，細胞出泡形成凋亡小體。透射電鏡下，CCL229細胞經(jīng)30panol／LCLT處理24小時后，核內(nèi)染色質(zhì)邊