吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘大鼠中TLR-7表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)吸入糖皮質(zhì)激素（布地奈德）干預(yù)哮喘大鼠，觀察氣道炎癥，測(cè)定氣道阻力、肺組織中TOLL樣受體7（TLR7）的mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)，觀察相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12mRNA轉(zhuǎn)錄的變化情況，了解吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)肺組織中TLR7受體的影響及相關(guān)細(xì)胞因子的變化。
　　方法：
　　1.40只清潔健康，約1月齡，體重150-170克的雄性SD大鼠，隨機(jī)分配為以下四個(gè)組別：正常對(duì)照組（Control組）、哮喘

2、模型組（Model組）、地塞米松干預(yù)治療組（Dexamethasone，DXM組），布地奈德混懸液干預(yù)治療組（Budesonide，BUD組），每組各10只。
　　2. Model組、DXM組、BUD組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第1天、第8天腹腔注射10﹪卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)溶液1毫升，包含免疫佐劑氫氧化鋁100毫克，實(shí)驗(yàn)第15天，用2﹪卵清蛋白溶液4毫升對(duì)大鼠進(jìn)行霧化吸入激發(fā)，每天霧化1次，每次約為10分鐘，連續(xù)14天。D

3、XM組大鼠在霧化吸入激發(fā)前半小時(shí)，給予腹腔注射地塞米松注射液，劑量為0.5毫克/千克, BUD組給予2毫升（1mg）布地奈德混懸液霧化吸入。在致敏階段與霧化激發(fā)階段，Control組采用0.9％氯化鈉代替卵清蛋白溶液進(jìn)行腹腔注射與霧化吸入。3.實(shí)驗(yàn)第28天，四組大鼠分別予以水合氯醛腹腔注射麻醉后用肺功能檢測(cè)氣道阻力變化，檢測(cè)完成后用腹主動(dòng)脈放血方法處死大鼠，分別取各組左右兩側(cè)肺組織，其中左肺組織作實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶連鎖反應(yīng)法（quant

4、itative real-time PCR，qPCR）來(lái)檢測(cè)肺組織TLR7、IL-12和IFN-γ mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并通過(guò)Western Blot檢測(cè)方法檢測(cè)大鼠肺組織中TLR7的蛋白表達(dá)水平；右側(cè)肺組織通過(guò)病理HE染色方法對(duì)各組大鼠肺組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，分析四組大鼠中氣道炎癥的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1．亞急性哮喘大鼠模型的建立：除Contol組外，其他三組大鼠隨著激發(fā)次數(shù)的增加，開(kāi)始出現(xiàn)煩躁不安、抓耳撓腮、食欲減

5、退、脫毛、呼吸急促、反應(yīng)遲鈍等哮喘樣表現(xiàn)；實(shí)驗(yàn)第28天進(jìn)行氣道反應(yīng)性測(cè)定，顯示Model組大鼠氣道反應(yīng)性有增高，與Control組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)合HE染色肺組織切片的形態(tài)學(xué)檢查顯示，Model組氣道周?chē)罅垦装Y細(xì)胞增多，嗜酸性粒細(xì)胞增加，氣道平滑肌增生，管腔內(nèi)粘性分泌物明顯增多，提示大鼠哮喘模型構(gòu)建成功。
　　2．BUD組病理組織學(xué)與氣道阻力檢測(cè)變化：經(jīng)干預(yù)后的哮喘大鼠肺組織病理學(xué)顯示，與Model組比較，

6、BUD組氣道炎性反應(yīng)減輕，與DXM相類(lèi)似。大鼠氣道阻力測(cè)定， BUD組氣道阻力在不同濃度鹽酸組胺誘導(dǎo)下，其阻力值與Model組比較減低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與Control組比較增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與DXM比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3．BUD組肺組織TLR7mRNA與TLR7蛋白表達(dá)量變化：哮喘大鼠Model組TLR7mRNA與蛋白的表達(dá)量均較Control組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P＜0.05)；BUD組與DXM組TLR7mRNA及蛋白表達(dá)量同Model組比較均明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。BUD組與DXM組TLR7mRNA及蛋白表達(dá)量相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Control組比較，明顯低于Control組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4. BUD組肺組織IFN-γ和IL-12的mRNA表達(dá)量變化：Model組IL-12 mRNA與IFN-γmRNA表達(dá)量較Control組比較

8、均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)； BUD組、DXM組表達(dá)量較Model組比較，IL-12和IFN-γ的mRNA的表達(dá)量均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但仍低于Control組(P＜0.05)；BUD組與DXM組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.卵清蛋白致敏與激發(fā)成功構(gòu)建亞急性哮喘大鼠模型。吸入性糖皮質(zhì)激素（布地奈德）能減輕氣道炎癥與降低氣道高反應(yīng)性。
　　2.布地奈德干預(yù)治療哮