吸入糖皮質(zhì)激素對哮喘宿主細(xì)菌防御的影響與作用機(jī)制.pdf

1、目的:糖皮質(zhì)激素是目前廣泛用于治療哮喘的最有效藥物,吸入糖皮質(zhì)激素仍然是控制哮喘氣道炎癥的主要治療方法,但有關(guān)哮喘患者使用吸入糖皮質(zhì)激素對宿主細(xì)菌防御影響的相關(guān)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過建立哮喘小鼠動物模型,經(jīng)氣道吸入糖皮質(zhì)激素,采用銅綠色假單胞菌經(jīng)鼻吸入,探討吸入糖皮質(zhì)激素對哮喘宿主的細(xì)菌防御的影響,并就其機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 方法:選取6-7周健康BALB／c雌性小鼠50只,隨機(jī)分為對照組,哮喘組,哮喘感染組,吸入布地奈德組,吸入

2、布地奈德感染組,每組各10只。小鼠用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)溶液致敏和激發(fā),對照組僅腹腔注射同等劑量生理鹽水。然后依次霧化吸入布地奈德和感染3×105 CFU銅綠色假單胞菌。24小時(shí)后處死小鼠,收集和分離血清并取下肺組織。肺組織勻漿液細(xì)菌培養(yǎng)作細(xì)菌定量。肺組織HE染色光鏡下觀察肺組織炎癥細(xì)胞侵潤程度,根據(jù)肺部炎癥改變的組織病理學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)細(xì)則評分(分為1-4分)。免疫組織化學(xué)法檢測氣道上皮細(xì)胞中CRAMP的表達(dá)水平。免疫蛋白

3、印記(Western Blot)法半定量測定肺組織中CRAMP的表達(dá)水平。ELISA法測定外周血血清中IL-4和IFN-γ的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.小鼠一般情況觀察:哮喘組小鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、鼻腔分泌物增多、撓鼻、呼吸急促和毛發(fā)暗淡無光、毛發(fā)豎立等癥狀。布地奈德組激發(fā)后表現(xiàn)較哮喘組明顯減輕。綠膿桿菌感染24小時(shí)后,哮喘感染組出現(xiàn)行動遲緩、眼睛緊閉、蜷縮一團(tuán)、鼻腔分泌物增多,耳溫冰涼等表現(xiàn)。布地奈德感染組除有上述表現(xiàn)外,還表現(xiàn)有

4、明顯的寒顫、小鼠扎堆擠在一塊,食欲明顯下降。2.肺組織鏡下氣道炎癥的改變:哮喘組小鼠支氣管和肺泡腔縮小,肺泡間隔增寬,支氣管管壁及肺間質(zhì)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤,以嗜酸粒細(xì)胞為主,支氣管、細(xì)支氣管及肺泡腔內(nèi)可見滲出物,氣管粘膜上皮水腫損傷,部分壞死脫落,伴杯狀細(xì)胞增生。吸入布地奈德組氣道炎癥明顯輕于哮喘組,經(jīng)藥物治療后氣道周圍炎癥明顯減輕。感染綠膿桿菌24小時(shí)后,哮喘感染組支氣管和肺泡腔縮小,部分肺泡完全縮小,肺泡間隔增寬,支氣管管壁及肺間

5、質(zhì)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤,以嗜酸粒細(xì)胞為主,支氣管、細(xì)支氣管及肺泡腔內(nèi)可見大量滲出物,氣管粘膜部分壞死脫落,伴杯狀細(xì)胞增生。吸入布地奈德感染組支氣管和肺泡腔明顯縮小,細(xì)支氣管及部分肺泡腔完全消失,支氣管及肺泡腔內(nèi)可見廣泛大量滲出物,氣管粘膜部分壞死脫落,可見膿細(xì)胞。同時(shí)肺組織炎癥評分顯示:哮喘組與對照組相比炎癥侵潤明顯CP<0.01,布地奈德組與哮喘相比炎癥減輕ap<0.01,布地奈德感染組與哮喘感染組相比炎癥侵潤明顯bp<0.01具有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)有意義。3.肺部細(xì)菌定量:布地奈德感染組細(xì)菌菌落數(shù)明顯高于哮喘感染組,兩者間差異性顯著P<0.05。4.肺臟CRAMP的表達(dá)水平:免疫組織化學(xué)檢測肺組織CRAMP表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)布地奈德感染組的抗菌肽表達(dá)水平明顯低于哮喘感染組。免疫印記檢測肺組織CRAMP表達(dá)水平結(jié)果顯示布地奈德感染組的條帶灰度值明顯較哮喘感染組降低,通過Quantity One軟件分析各組灰度值,顯示布地奈德感染組與哮喘感染組相比差異性顯著(P<0.05)。5.

7、小鼠外周血血清中IL-4和IFN-γ水平的測定:哮喘組IL-4水平與對照組相比明顯升高(P<0.01)、IFN-γ水平明顯降低(P<0.01)。布地奈德組IL-4水平低于哮喘組(P<0.01),但I(xiàn)FN-γ水平兩組間無明顯差異(P>0.05)。哮喘感染組IL-4水平與對照組明顯升高(P<0.01)、IFN-γ水平明顯降低(P<0.01)。布地奈德感染組IL-4水平高于哮喘感染組(P<0.01),IFN-γ水平低于哮喘感染組,兩組間差異有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論:1.哮喘小鼠的血清中IL-4水平顯著升高,IFN-γ水平明顯下降,證實(shí)了Th1／Th2平衡失調(diào)在哮喘發(fā)病機(jī)理中起著重要的作用。2.吸入布地奈德能夠減輕哮喘小鼠的氣道炎癥,但卻未能明顯改善Th1／Th2平衡失調(diào)。3.吸入布地奈德可以①減少哮喘宿主在抗菌反應(yīng)中CRAMP在肺組織內(nèi)的活化表達(dá)；②減弱哮喘宿主清除細(xì)菌的能力；③加重變應(yīng)原誘發(fā)及細(xì)菌感染的氣道炎癥。吸入糖皮質(zhì)激素可抑制哮喘宿主細(xì)菌防