吸入糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘大鼠肺組織YKL-40表達(dá)的影響.pdf

1、目的
　　通過對(duì)亞急性的哮喘大鼠模型進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究，了解吸入性糖皮質(zhì)激素藥物使用后，大鼠的氣道炎癥及氣道阻力發(fā)生的變化，以及大鼠肺組織的甲殼質(zhì)酶3樣蛋白質(zhì)1(Chitinase-3-like-1 protein，YKL-40)、白細(xì)胞介素-8（Interleukin-8， IL-8）表達(dá)變化，了解吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘大鼠肺組織中YKL-40 mRNA及蛋白、IL-8mRNA表達(dá)水平的影響。
　　方法
　　1.40只清

2、潔健康，約1月齡，體重150-170克的雄性SD大鼠，隨機(jī)分配為以下四個(gè)組別：正常對(duì)照組（Control組）、哮喘模型組（Model組）、地塞米松組（DXM組），布地奈德組（BUD組），每一組分別劃分10只SD大鼠。
　　2. Model組大鼠、DXM組大鼠、BUD組大鼠在實(shí)驗(yàn)進(jìn)展的第1天、第8天給予腹腔注射10﹪的卵清蛋白(OVA)溶液1毫升，稀釋有免疫佐劑氫氧化鋁0.1克。在實(shí)驗(yàn)第15天，用2﹪的卵清蛋白溶液4毫升對(duì)大鼠進(jìn)行霧

3、化吸入以激發(fā)哮喘，每1次激發(fā)的時(shí)間為10分鐘，1次/天，連續(xù)共兩周。其中DXM組大鼠在先給予腹腔注射地塞米松注射液（劑量按0.5毫克/千克計(jì)算）后半小時(shí)再予以霧化吸入激發(fā)OVA，而布地奈德組先給予布地奈德來泵霧化吸入(按1mg/2ml使用)。相對(duì)應(yīng)正常對(duì)照組則采用生理鹽水代替卵清蛋白溶液進(jìn)行腹腔注射與霧化吸入以致敏與激發(fā)哮喘產(chǎn)生。
　　3.在實(shí)驗(yàn)第28天，四組大鼠先予以檢測(cè)氣道阻力值，在檢測(cè)結(jié)束后,采用剪斷大鼠腹主動(dòng)脈的方法來處死

4、動(dòng)物，在獲取左右兩側(cè)肺組織后，取左肺組織用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法（qPCR）來檢測(cè)肺組織中YKL-40與IL-8 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并通過Western Blot檢測(cè)方法來檢測(cè)大鼠肺組織中YKL-40的蛋白表達(dá)水平；取大鼠右側(cè)肺組織通過HE染色病理檢查來分析四組大鼠中氣道炎癥的變化情況。
　　結(jié)果
　　1.成功建立亞急性哮喘大鼠模型：實(shí)驗(yàn)第14天開始予以2﹪卵清蛋白溶液霧化吸入后，隨著次數(shù)增加逐漸出現(xiàn)以下哮喘發(fā)作癥狀：面部

5、搔抓、呼吸頻率加快、點(diǎn)頭呼吸、面部紫紺，大小便失禁等，于實(shí)驗(yàn)第28天予檢測(cè)其氣道阻力變化，氣道阻力結(jié)果提示哮喘模型組的氣道阻力均有顯著增加，與正常對(duì)照組比較有顯著的差異（P＜0.05）；通過大鼠肺組織的HE染色病理切片進(jìn)行觀察：Model組肺組織中支氣管與肺泡周圍嗜酸性粒細(xì)胞增多，氣道內(nèi)有較多粘性分泌物，支氣管管壁稍顯增厚。
　　2.BUD組大鼠肺組織氣道炎癥的變化:與哮喘大鼠Model組比較， BUD組炎癥細(xì)胞及粘性分泌物均明顯

6、減少。DXM組同BUD組對(duì)比，形態(tài)學(xué)差異不大。control組中未發(fā)現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng)。
　　3.BUD組大鼠氣道阻力變化:經(jīng)過鹽酸組胺霧化吸入后，哮喘大鼠Model組的氣道阻力與Control組比較顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。布地奈德組大鼠氣道阻力和哮喘模型大鼠相比較有顯著降低，有顯著的差異(P＜0.05)，與正常對(duì)照組相比較氣道阻力有明顯增高，有顯著的差異(P＜0.05)，同地塞米松組相比較，發(fā)現(xiàn)沒有顯著差異。

7、r>　　4. BUD大鼠肺組織中YKL-40與IL-8的mRNA變化：哮喘大鼠Model組的肺組織YKL-40 mRNA與IL-8的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與Control組比較顯著增高(P＜0.05)。BUD組肺組織的YKL-40 mRNA與IL-8的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與Model組比較顯著降低(P＜0.05)，仍顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，同地塞米松組對(duì)比沒有顯著差異。
　　5. BUD組大鼠肺組織YKL-40蛋白表達(dá)量變化情況

8、：哮喘模型組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表達(dá)量同正常對(duì)照組相比有顯著的升高(P＜0.05)，布地奈德組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表達(dá)量同哮喘模型組相比較有顯著的降低(P＜0.05)，但仍高于正常對(duì)照組，同地塞米松組比較沒有顯著的差異。
　　結(jié)論
　　1.以卵清蛋白做為抗原可成功建立哮喘大鼠亞急性模型。哮喘模型組大鼠的肺組織中YKL-40的蛋白表達(dá)量同正常對(duì)照組相比有顯著的升高，布地奈德組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表