恩諾沙星在中華絨螯蟹中的代謝動力學及其休藥期研究.pdf

1、江蘇的中華絨螯蟹已發(fā)展成為超過100億元人民幣的大產(chǎn)業(yè),名牌大閘蟹暢銷國內(nèi)外。但是,與此同時,中華絨螯蟹的質(zhì)量安全也經(jīng)受著越來越嚴重的疾病暴發(fā)、獸藥殘留、種質(zhì)退化的困擾。本工作側(cè)重研究了中華絨螯蟹養(yǎng)殖過程中使用恩諾沙星的使用問題,旨在對該藥品在中華絨螯蟹中的應用和推廣提供科學的依據(jù)。研究主要分為如下幾個部分：(1)中華絨螯蟹體內(nèi)恩諾沙星等喹諾酮藥物殘留檢測方法的研究；(2)恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的藥物代謝動力學研究；(3)水溫對恩諾沙

2、星在中華絨螯蟹體內(nèi)藥物代謝動力學的影響；(4)恩諾沙星與中華絨螯蟹血漿蛋白結(jié)合率的研究；(5)恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)使用修藥期(withdrawal time)的研究。具體如下： 1、建立了中華絨螯蟹體內(nèi)恩諾沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星殘留量同時檢測的反相高效液相色譜法(RP-HPLC)方法。考察了三種喹諾酮類藥物殘留的分離與流動相組成、pH值及乙腈含量的關(guān)系,優(yōu)化了色譜務件。中華絨螯蟹肝臟成分復雜,脂肪類化合物含量高,色素等干擾

3、物質(zhì)多,極易干擾目標物的檢測。通過改進前處理過程,采用振蕩萃取-濃縮-高速離心萃取的前處理過程,有效地減少了干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。研究表明,該方法線性關(guān)系和重復性良好,樣品中三種喹諾酮類藥物殘留的回收率在73％～86％之間,相對標準偏差2.01％～4.29％(n=5),最低檢測限為10μg·kg-1。用該方法對肌肉注射給藥后72小時內(nèi)中華絨螯蟹肝臟組織進行檢測,恩諾沙星及其主要代謝物環(huán)丙沙星都可以檢測到,為弄清楚恩諾沙星在中華絨螯蟹

4、體內(nèi)的分布、代謝的研究提供了檢測方法。 2、在17±2℃條件下,研究了中華絨螯蟹肌肉注射每只蟹0.1 mL恩諾沙星(恩諾沙星原粉用雙蒸水配成6.25 mg·mL-1)的藥代動力學。中華絨螯蟹肌肉注射恩諾沙星后,血液中藥物濃度很快達到峰值,并迅速向組織中分布,血藥經(jīng)時過程符合一級吸收二室開放代謝模型,主要藥動學參數(shù)為:T1/2α5.29h,T1/2β92.42h,K210.078h-1,K120.048 h-1,K100.01 2

5、h-1,AUC304.80 μg·ml-1h-1,CLs0.016 L·kg-1h-1。藥物在血液中的藥時曲線方程為Cblood=6.68e-0.49t+3.38e-0.013t。在中華絨螯蟹的血液及肌肉、肝胰腺、鰓組織中均能檢測到恩諾沙星的代謝物環(huán)丙沙星殘留,最低檢測限為10μg·kg-1。 3、研究在17、23和29℃水溫下,恩諾沙星(ENR)在中華絨螯蟹血淋巴、肌肉和肝臟組織中的代謝規(guī)律和組織分布的影響。以3.0 mg·k

6、g-1劑量單次肌肉注射給藥,于給荮后1、10 min及0.5、1、2、8、16、24、48、72和168 h取各組織樣品,藥物含量由高效液相色譜法同時測定。研究結(jié)果表明,在3個溫度下,血淋巴和肌肉組織中ENR含量瞬時達到峰值,而肝臟中ENR含量則隨給藥時間,先上升后下降,各組織含量從大到小依次為：血淋巴、肝臟、肌肉。水溫23和29℃下,CIP含量及CIP與兩種藥物含量之比從大到小依次為：肝臟、血淋巴、肌肉；各組織中CIP含量及CIP與兩

7、種藥物含量之比與水溫呈正相關(guān)。應用藥代動力學計算軟件3P97分析結(jié)果表明：肝臟組織中ENR的代謝規(guī)律符合二室開放模型,在給定3個溫度下,吸收半衰期(分別為：1.81、0.97和0.14 h)、消除半衰期(分別為：240.27、60.57和37.59 h)、藥時曲線下總面積(分別為：2148.7、324.2和264.5 μg·mL-1·h-1)與溫度呈負相關(guān),而總消除率與溫度呈正相關(guān),分別是0.0014、0.0093和0.011 L·kg

8、-1·h-1。 4、研究了恩諾沙星與中華絨螫蟹血漿的蛋白結(jié)合率。實驗結(jié)果顯示：恩諾沙星與牛血清白蛋白(1.0mg·mL-1)的蛋白結(jié)合率在13.0％～29.0％之間。實驗測定的中華絨螯蟹血漿蛋白濃度為64.0±0.3mg·mL-1,蛋白分子量主要集中在66.2KDa～97.1KDa之間,恩諾沙星與中華絨螯蟹血漿蛋白的結(jié)合率在50.0～78.8％之間。實驗結(jié)果認為,恩諾沙星與中華絨螯蟹血漿50％左右的蛋白結(jié)合率能充分保證其藥效的發(fā)

9、揮,可以在中華絨螯蟹養(yǎng)殖過程中考慮使用。 5、研究了單次肌肉注射恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的休藥期。實驗數(shù)據(jù)通過藥代動力學分析軟件3P97在電腦上進行分析。中華絨螯蟹在肌肉注射恩諾沙星后經(jīng)時過程符合二室開放模型,并計算出其主要藥動學參數(shù)。以Michaelis-Menten動力學理論作為基礎(chǔ),以中國藥理學會數(shù)學藥理專業(yè)委員會編寫的3P97實用藥動學計算程序計算出的參數(shù)作為條件,建立了利用迭代法推算漁藥休藥期的方案。并確定,中華絨螯蟹