BAT3介導的YWK-Ⅱ蛋白-APLP2穩(wěn)定性增加與腫瘤發(fā)生的關系及Nrdp1s的功能初步研究.pdf

1、北京協和醫(yī)學院(中國醫(yī)學科學院)博士學位論文BAT3介導的YWKⅡ蛋白APLP2穩(wěn)定性增加與腫瘤發(fā)生的關系及Nrdp1s的功能初步研究姓名：吳為申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：王琳芳；繆時英200907北京協和醫(yī)學院博士研究生論文眾所周知，泛素蛋白酶體途徑和吞噬溶酶體途徑是體內負責蛋白質降解的兩條主要途徑，令人好奇的是YWKⅡ蛋白／AlPLP2究竟通過哪條途徑被降解BAT3如何抑制這種降解本研究發(fā)現，當用蛋白酶體抑

2、制劑MGl32或溶酶體抑制劑氯喹處理細胞后，YWKII蛋白腳LP2的蛋白水平顯著提高。CHX追蹤實驗表明MGl32和氯喹均顯著增強YWKII蛋白，APLP2的穩(wěn)定性，這些結果表明體內YWKII蛋白／APLP2同時被泛素蛋白酶體途徑和吞噬溶酶體途徑這兩條途徑所降解。與此同時，本研究發(fā)現MGl32處理細胞后體內YWKII蛋白／|APLP2泛素化增加，而且rem實驗也證實MGl32可以增加YWKII蛋白／APLP2泛素化，這些結果證實體內存在

3、泛素化形式的YWK一Ⅱ蛋白／APLP2。當外源表達BAT3時，以泛素化形式存在的YWKⅡ蛋白／APLP2明顯減少。因此我們的結果證實BAT3可以通過抑制YWKII蛋白／APLP2的泛素化而減少YWKII蛋白／APLP2的降解，增加YWK—II蛋白／APLP2的穩(wěn)定性，提高YWKII蛋白腳LP2蛋白水平。本室前期工作中發(fā)現YWKII蛋白／APLP2參與調控細胞生長以及凋亡過程。本研究運用RealtilllePCR和Westemblonin

4、g方法比較了正常胰腺組織以及五株胰腺癌細胞中YWKII蛋白腳LP2m】剛A及蛋白質表達的差異。結果發(fā)現，五株胰腺癌細胞中YWKII蛋白／APLP2mRNA及蛋白質的表達均較正常胰腺組織高。此外，應用組織芯片技術驗證了YWKII蛋白／APLP2蛋白在胰腺癌組織中表達水平比正常胰腺組織蛋白水平明顯增強。這些結果提示YWKII蛋白／APLP2蛋白可能參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。在本研究中，通過將表達YWKII蛋白／APLP2IⅢAi的慢病毒感染

5、胰腺癌ASPC—l細胞和結腸癌HCTll6細胞，成功構建YWKⅡ蛋白／APLP2消減的穩(wěn)定細胞株。我們發(fā)現用UV照射細胞后，檢測凋亡標記分子caSpase3和P_6舢，結果顯示與對照組相比，YwKII蛋白，APLP2砌qAi組細胞切割的caSp硒e3和PARP都明顯增多，提示YWKII蛋白／APLP2被消減后可以增加細胞對凋亡的敏感性。而本室前期工作同時表明過表達YWKII蛋白／APLP2可以抑制CHX誘導的細胞凋亡。這些結果提示YWK

6、II蛋白／APLP2可能通過抑制細胞凋亡而參與腫瘤發(fā)生。我們應用凋亡誘導劑CPT刺激HCTll6細胞或小鼠精原細胞GC1，發(fā)現YWKII蛋白／APLP2隨著凋亡的進行先升高后降低。與對照組相比，過表BAT3可以明顯提高YWKⅡ蛋白／APLP2在凋亡過程中的表達，這些結果提示在凋亡早期階段，YWKⅡ蛋白腳LP2表達增高可作為體內的一種拮抗凋亡、自我保護的途徑?；谝陨涎芯拷Y果，我們感興趣的是BAr3在人體內腫瘤發(fā)生過程中是否也能介導相似的