PRRSV熒光原位雜交檢測法的建立及臨床應用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)以引起仔豬、保育豬呼吸系統(tǒng)障礙以及母豬繁殖障礙為特征，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。PRRSV為單鏈RNA病毒，屬于動脈炎病毒科，含有9個開放閱讀框。病毒主要分為兩個亞型:北美洲型VR-2332和歐洲型LV。2006年中國爆發(fā)了一場規(guī)模巨大的“豬高熱癥”，引起該病的病毒不同于之前的PRRSV，其致病力

2、強，以高熱、高致病性和高致死率為特征，經(jīng)過基因分析確定，這類型的病毒為VR-2332的變異毒株，又稱HP-PRRSV。HP-PRRSV病毒在Nsp2當中相比于經(jīng)典株有90個堿基缺失，并且該突變能夠穩(wěn)定遺傳。
　　本實驗首先利用HuN4毒株通過滴鼻的方法感染仔豬，建立病毒模型。在第5、7、14天分別剖殺實驗組與對照組樣本，固定組織，制成石蠟切片。通過HE染色與免疫熒光組織化學法觀察組織學變化，檢測病毒分部。分析Nsp2上穩(wěn)定的序列合

3、成寡聚核苷酸熒光標記探針，通過熒光原位雜交法檢測相應組織樣品，并且對黑龍江地區(qū)50個病例進行檢查。
　　實驗結果顯示，機體肺臟以及淋巴結最先出現(xiàn)病變。肺部出血、水腫、充血嚴重，出現(xiàn)實變和壞死灶，淋巴結水腫至正常的2-10倍，出現(xiàn)針尖樣出血。肝臟和脾臟出現(xiàn)不同程度的水腫和出血。腎臟腫脹或者萎縮，有出血點。組織學觀察可看到典型的間質(zhì)性肺炎，淋巴結和脾臟淋巴細胞大量減少并且壞死，可觀察到大量巨噬細胞，有單核細胞和炎性細胞的浸潤。免疫熒光

4、組織化學可觀察病毒在機體各個器官的分布規(guī)律，結果表明感染第五天，可在淋巴結和肺臟、脾臟檢測到陽性信號，第七天可從腎臟、肝臟看到明顯病毒顆粒，但是信號較少。心臟、胰腺在整個實驗過程中均呈現(xiàn)出陰性反應。
　　應用熒光原位雜交法檢測各個組織，結果顯示陽性信號主要分布于肺臟的肺泡間隔當中的巨噬細胞以及血管內(nèi)皮細胞，淋巴結當中的淋巴小結以及脾臟當中的淋巴細胞與巨噬細胞。肝臟陽性信號主要出現(xiàn)于竇狀隙，腎臟主要分布于腎小球以及腎間質(zhì)。