雙色實(shí)時(shí)熒光定量PCR及熒光原位雜交檢測(cè)唐氏綜合征.pdf

1、目的：建立唐氏綜合征基因診斷和產(chǎn)前診斷的雙色熒光定量PCR新技術(shù)，以實(shí)現(xiàn)快速、簡(jiǎn)便、高通量檢測(cè)這一發(fā)病高、危害大的染色體異常綜合征；并應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞和羊水中胎兒細(xì)胞培養(yǎng)后的染色體鋪片，探索應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)唐氏綜合征的可能性；用兩者的結(jié)果相互印證和比較兩者各自的優(yōu)缺點(diǎn)?！　》椒ǎ禾崛?2例正常人和27例唐氏綜合征患者的外周血淋巴細(xì)胞和羊水中胎兒細(xì)胞DNA；設(shè)計(jì)合成含兩種熒光素的DSCR1和GAPD基因特異

2、的TaqMan探針，然后優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，在同一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)進(jìn)行DSCR1基因和看家基因GAPD的Q-PCR反應(yīng)，并使得兩者的反應(yīng)效率基本一致，每個(gè)樣本重復(fù)三次，比較正常人群和患者群體兩個(gè)基因的△CT的變異范圍，對(duì)兩組人的△CT做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，觀察兩者的△CT均值是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用熒光間接標(biāo)記的人的DSCR1基因的部分序列與染色體進(jìn)行原位雜交和用熒光直接標(biāo)記的商業(yè)化的人21號(hào)染色體的長(zhǎng)臂2區(qū)2帶的原位雜交探針與正常人和患者的染色體進(jìn)

3、行原位雜交。　　結(jié)論：本研究建立的雙色實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠正確區(qū)分21三體和正常人的DSCR1基因劑量，是唐氏綜合征的一個(gè)可行的快速、準(zhǔn)確、高通量、費(fèi)用較為低廉的檢測(cè)方法。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，得出準(zhǔn)確的變異范圍后，該法可以應(yīng)用到唐氏綜合征的診斷和產(chǎn)前診斷中。熒光原位雜交也是一個(gè)準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，尤其是當(dāng)他可以直接應(yīng)用于外周血或是羊水的細(xì)胞滴片時(shí)，此法也是一個(gè)快速的方法，但是用商業(yè)化的原位雜交探針費(fèi)用較高，大量應(yīng)用還存在一定的困難?！　?/p>