多色熒光原位雜交技術(shù)的建立及其在食管癌研究中的應(yīng)用.pdf

1、本研究旨在以細(xì)胞系為模型建立一種多色熒光原位雜交技術(shù)，并將其應(yīng)用于實(shí)體腫瘤的染色體畸變的鑒定。 方法：根據(jù)組合標(biāo)記全染色體涂染探針(wholechromosomepaints，WCP)的原則，采用4種熒光染料(DEAC，F(xiàn)ITC，Cy3和Cy5)，通過(guò)DOP-PCR法(degenerateoligonucleotideprimer-polymerasechainreaction)直接擴(kuò)增，標(biāo)記兩組多色painting探針池，先后

2、兩次雜交到相同的中期染色體片，探針信號(hào)通過(guò)裝備了相應(yīng)濾鏡組合及CCD相機(jī)的熒光顯微鏡捕獲，應(yīng)用MetamorphImagingSystem軟件進(jìn)行圖像的攝取和處理，獲得多色熒光原位雜交圖。結(jié)合反相DAPI顯帶技術(shù)，對(duì)兩例食管癌細(xì)胞系KYSE180和KYSE450(均來(lái)自男性患者)進(jìn)行全染色體組畸變分析，根據(jù)ISCN(1995)標(biāo)準(zhǔn)鑒定其核型。結(jié)果：成功地建立了一種十二色熒光原位雜交技術(shù)，應(yīng)用該技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)KYSE180中畸變最多的染色體

3、是1號(hào)、3號(hào)、5號(hào)、7號(hào)和14號(hào)。KYSE180的具體核型為：54(51-55)，-Y,+der(1)t(6；1)(pter→p10：：q10→qter)，+der(1)t(1；3)(q31→q10：：q21→q26)，dup(3)(q24→q26)，der(3)del(3)(：p21→q27：)，+der(3)del(3)(：p21→q27：)，+der(3)t(3；5)(qter→q10：：q14→q23)，+der(3)t(6；3

4、)(q24→q16：：p12→qter)，+der(3)t(3；6)(pter→q10：：q11→qter)，der(4)t(4；8)(p15→qter：：q23)，der(5)t(5；14；3)(pter→q23：：q21→q31：：q28→q24)，+der(5)t(5；8)(pter→p10：：q24→q23)，+der(5)t(5；6)(pter→p10：：p12→p22)，-6，der(6)t(6；3)(pter→q14：：q

5、13→q22)，del(7)(pter→q32：)，+der(7)del(7)(pter→q32：)，+der(7)t(10；7)(q21→q10：：q10→qter)，+der(8)t(8；16；16；2)(p12→q11：：p13→p12：：q12→q24：：p24→p22)，-9，-9，der(10)t(14；10)(qter→q10：：q10→qter)，+11，del(12)(：q10→qter)，+der(12)t(4；12

6、；3；2)(p15：：p12→q12：：q21→q24：：p12→p24)，-13，-13，der(14)t(5；14；1)(p14：：q10→qter：：p11→p21)，der(14)t(3；14；5)(qter→q13：：pter→qter：：p14→p11)，+der(14)t(14；X；3)(qter→q10：：p10→p22：：q13→q26)，der(15)t(14；15)(q12→q21：：pter→qter)，der(

7、15)t(18；15)(q22→q10：：q10→qter)，+der(16)del(16)(：p12→q22：)，der(17)t(17；3)(pter→qter：：p14→p24)，+der(17)t(3；11；17；8)(pter→p14：：p14→p11：：q10→q24：：p22→p12)，-18，+der(19)t(10；19)(p12→p11：：pter→qter)，-20，-22。KYSE450中畸變最1多的染色體是1號(hào)

8、、7號(hào)、8號(hào)、9號(hào)和12號(hào)染色體。KYSE450的具體核型為：54(51-56)-Y,der(1)t(9；1)(pter→p10：：q10→qter)，+der(1)t(19；1)(p12→p10：：q10→qter)，+der(1)t(1；7；7)(pter→p10：：p11→p21：：q11→q35)，+der(2)t(16；2)(q21→q11：：q10→qter)，del(4)(pter→q24：)，der(5)t(5；15)(

9、pter→qter：：q21)，der(7)t(7；3)(p21→p11：：q10→q11)，der(7)t(7；11)(p21→q11：：q23→q22)，+der(7)t(11；7)(qter→q10：：q10→qter)，+8，+der(8)del(8)(：p22→q12：)，+der(8)t(3；8)(q26→q28：：p12→qter)，+der(8)t(8；4)(p22→q21.1：：q32→qter)，+der(8)t(8

10、；5)(p12→q21.1：：p14)，der(9)t(9；12)(pter→q31：：q21)，der(9)t(17；9)(q22→q24：：p21→qter)，+der(9)t(9；12)(p21→qter：：q21)，-10，-10，der(11)t(11；7；5)(p14→qter：：q22：：q32→q23)，der(12)t(12；9)(pter→q24.2：：q22→q31)，del(12)(pter→q22：)，+der

11、(12)t(6；12)(p12：：p12→q23)，der(14)t(9,14)(q21→q31：：pter→qter)，+der(14)del(14)(pter→q21：)，+der(16)del(16)(：p12→qter)，+der(17)del(17)(：p12→q23：)，del(18)(pter→q11：)，del(19)(pter→q13.1：)，-20，-20，-22。兩細(xì)胞系中染色體易位共同的斷點(diǎn)發(fā)生于1q10，3q1