RAMP在黑木耳品種鑒定中的應(yīng)用研究.pdf

1、黑木耳[Auricularia auricula(L. ex Hook.) Underwood]是我國最先栽培的食用菌之一。我國黑木耳產(chǎn)量在全世界食用菌產(chǎn)量中居第七位，主要出口日本，東南亞，西歐和北美等一些國家，在我國食用菌出口中占有重要地位。隨著“培育者權(quán)利”保護(hù)意識的增加，世界各國都開始制定種苗保護(hù)制度，加強(qiáng)本國種質(zhì)資源的保護(hù)。在世界品種資源保護(hù)興起的大環(huán)境中，我國也應(yīng)該加強(qiáng)種質(zhì)資源的保護(hù)力度。為了能夠更好的對食用菌種質(zhì)資源進(jìn)行保護(hù)

2、，開發(fā)一種可靠、穩(wěn)定的食用菌鑒定方法是關(guān)鍵。本論文對吉林省生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的22個黑木耳品種進(jìn)行鑒定研究，旨在探索黑木耳遺傳變異的規(guī)律和適合黑木耳品種鑒定的方法、分析生產(chǎn)中菌種名稱混亂的原因、為相關(guān)研究提供參考依據(jù)。本論文的研究分為三個部分： 首先，對能夠提取高質(zhì)量黑木耳基因組DNA的方法進(jìn)行了探索。由于黑木耳菌絲中含有大量的膠狀物質(zhì)，在DNA提取時常常和DNA結(jié)合在一起形成粘稠狀懸浮物，影響DNA沉淀。本文對DNA提取時常用的S

3、DS法進(jìn)行了改進(jìn)，并與CTAB法、試劑盒法、改進(jìn)前的SDS法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)改進(jìn)后的方法在提取黑木耳基因組DNA時能夠很好的去除菌絲體中的多糖和膠狀物質(zhì)。對這幾種方法提取的DNA進(jìn)行經(jīng)紫外掃描分析，證明改進(jìn)后的方法顯著的提高了DNA的質(zhì)量。 其次，對黑木耳的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。食用菌的菌絲在生產(chǎn)與保存過程中很容易產(chǎn)生菌種退化現(xiàn)象，菌種退化是由于菌絲體的遺傳物質(zhì)發(fā)生變異而造成的。為了證明這些潛在的變異是否已經(jīng)達(dá)到了品種級別，本文將

4、同一個黑木耳品種進(jìn)行連續(xù)繼代培養(yǎng)12代，然后利用RAMP方法比較第2代和第12代之間的區(qū)別。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑木耳在傳代過程中具有較高的穩(wěn)定性。常規(guī)的操作引起的機(jī)械損傷并不能導(dǎo)致黑木耳菌株產(chǎn)生品種水平上的變異。 最后，利用RAMP(隨機(jī)擴(kuò)增微衛(wèi)星多態(tài)性)標(biāo)記對22個在吉林省黑木耳生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的品種進(jìn)行了鑒定研究。本文對40對引物進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)其中有21對引物可以區(qū)分不同的黑木耳品種，在這21對引物中有9對呈現(xiàn)出了很好的多態(tài)性，其中有

5、3對結(jié)果比較接近而且有很好的重復(fù)性和多態(tài)性，可以作為黑木耳品種鑒定的有效引物。通過對22個黑木耳品種比較分析，發(fā)現(xiàn)其中存在同種異名現(xiàn)象。尤其是在菌農(nóng)自己繁育的品種中，這種現(xiàn)象更為明顯。 通過本文的研究篩選出了適合對黑木耳品種進(jìn)行鑒定的RAMP標(biāo)記引物，通過對鑒定結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)吉林省黑木耳生產(chǎn)中應(yīng)用的品種存在同種異名現(xiàn)象。并進(jìn)一步證明了黑木耳品種具有較高的傳代穩(wěn)定性，因此生產(chǎn)中產(chǎn)生的同種異名現(xiàn)象更可能是人為因素造成的。本文通過對常