阿司匹林引起大鼠乙酸胃潰瘍復(fù)發(fā)及其機(jī)制.pdf

1、1．研究背景 消化性潰瘍的特點(diǎn)是易容復(fù)發(fā)，而且難于防止。臨床觀察表明，非甾體抗炎藥(NSAIDs)是引起復(fù)發(fā)的重要因素，阿司匹林(Aspifin，Asp)是NSAIDs藥的代表藥。由于Asp的藥理作用非常廣泛，使得Asp成為全球范圍內(nèi)消耗量最多的藥物之一。但Asp在治療疾病的同時(shí)，產(chǎn)生了嚴(yán)重的副作用，即能引起胃炎、胃潰瘍和潰瘍復(fù)發(fā)等。 治療消化性潰瘍的關(guān)鍵在于防止復(fù)發(fā)，但消化性潰瘍復(fù)發(fā)的機(jī)理還不清楚，因而很難防止復(fù)發(fā)。因

2、此，闡明消化性潰瘍復(fù)發(fā)的機(jī)理，將能有效地預(yù)防潰瘍復(fù)發(fā)，指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用NSAIDs。本論文采用乙酸潰瘍模型，在潰瘍愈合后用Asp誘導(dǎo)復(fù)發(fā)，通過檢測(cè)關(guān)鍵細(xì)胞因子和生理生化指標(biāo)并進(jìn)行分析，探討了Asp引起潰瘍復(fù)發(fā)的作用和復(fù)發(fā)的機(jī)制，這對(duì)防止?jié)儚?fù)發(fā)、徹底治愈潰瘍具有重要意義。 2．材料與方法 2．1．模型復(fù)制：實(shí)驗(yàn)采用Wistar雄性大鼠，按文獻(xiàn)報(bào)道的方法復(fù)制胃潰瘍模型。 2．2．實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)分為兩步，第一步是在潰

3、瘍制作后的第3、15、25天用乙醚麻醉處死部分大鼠，觀察潰瘍形態(tài)。第二步是在第25天觀察潰瘍形態(tài)后，將其余的大鼠隨機(jī)分為禁食對(duì)照組、鹽水對(duì)照組(灌胃法給予生理鹽水)、阿司匹林組(灌胃法給予Asp)。在潰瘍制作后的第55天，采集標(biāo)本，進(jìn)行分析。 2．3．潰瘍形態(tài)觀察：測(cè)量潰瘍面積后，對(duì)潰瘍進(jìn)行大體和光鏡下觀察。 2. 4．潰瘍愈合質(zhì)量評(píng)價(jià)：光鏡下測(cè)定擴(kuò)張腺體數(shù)、再生黏膜厚度、黏膜下組織中的微血管和炎細(xì)胞數(shù)量。 2．

4、5．胃黏膜PGE<,2> 胃酸分泌：測(cè)量胃液量和胃液的pH，ELISA方法測(cè)定PGE<,2>。 2．6．環(huán)加氧酶表達(dá)：RT-PCR檢測(cè)胃黏膜COX-1(環(huán)加氧酶-1)、COX-2 mRNA的表達(dá)；Western blot方法檢測(cè)胃黏膜COX-1、COX-2蛋白的表達(dá)。 2．7．胃黏液、胃黏膜血流(GMBF)和內(nèi)皮素(ET)測(cè)定：按文獻(xiàn)報(bào)道的方法測(cè)定胃黏液，氫氣清除法測(cè)定GMBF，ELISA方法測(cè)定血漿中的ET含量。

5、 2．8．生長(zhǎng)因子：ELISA方法測(cè)定胃粘膜表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)和血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)。 2．9．炎癥因子：ELISA方法測(cè)定血清中的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和血漿中的白細(xì)胞介素-β(IL-1β)。 2．10．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。組間差異采用單因素方差分析中的LSD法。方差不齊時(shí)用秩和檢驗(yàn)中的Mann-Wh

6、itneyU方法。P<0.05差異顯著。 3．實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3．1．Asp對(duì)潰瘍形態(tài)的影響：潰瘍制作后第25天，潰瘍完全愈合。在阿司匹林組，在第45天，8只大鼠中的2只出現(xiàn)復(fù)發(fā)，在55天，8只中的5只出現(xiàn)復(fù)發(fā)。 3．2．Asp對(duì)潰瘍愈合質(zhì)量的影響：在潰瘍制作后的第55天，在阿司匹林組，囊樣擴(kuò)張腺體和炎細(xì)胞數(shù)多于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；再生黏膜厚度和微血管數(shù)低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)。

7、 3．3．Asp對(duì)PGE<,2>和胃酸分泌的影響：在潰瘍制作后的第55天，在阿司匹林組，PGE<,2>少于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；胃液量多于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；胃液的pH低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)。 3．4．Asp對(duì)環(huán)加氧酶表達(dá)的影響：在潰瘍制作后第55天，COX-1 mRNA和蛋白的表達(dá)在3組間沒有差異，與第15天的基本相同；在阿司匹林組，COX-2 mRNA和蛋白的表

8、達(dá)多于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組，與第15天的基本相同。 3．5．Asp對(duì)胃黏液、GMBF和ET的影響：在潰瘍制作后的第55天，在阿司匹林組，胃黏液和GMBF少于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；血漿ET高于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)。 3．6．Asp對(duì)生長(zhǎng)因子的影響：在潰瘍制作后的第55天，在阿司匹林組，胃黏膜EGF和TGF-α低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；血清中VEGF低于禁食對(duì)照組和鹽水

9、對(duì)照組(P<0.01)。 3．7．Asp對(duì)炎癥因子的影響：在潰瘍制作后的第55天，在阿司匹林組，血清中TNF-α和血漿中IL-1β高于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)。 4．討論 在潰瘍制作后的第25天潰瘍?nèi)坑?。?5天以后，給予大鼠Asp，發(fā)現(xiàn)在第55天，8只大鼠中的5只出現(xiàn)復(fù)發(fā)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明用Asp誘導(dǎo)復(fù)發(fā)是成功的。 4．1．Asp對(duì)潰瘍形態(tài)學(xué)的影響：在模型復(fù)制后的第3天，出現(xiàn)一個(gè)

10、大而圓的潰瘍，第25天，肉眼及鏡下觀察潰瘍?nèi)坑?。?.5天，在阿司匹林組，肉眼及鏡下觀察在涂乙酸的部位出現(xiàn)了復(fù)發(fā)潰瘍。這些結(jié)果表明，在愈合的潰瘍部位，Asp引起了復(fù)發(fā)。 4．2．Asp對(duì)愈合質(zhì)量的影響：在模型復(fù)制后的第55天，阿司匹林組的擴(kuò)張腺體數(shù)、炎細(xì)胞數(shù)高于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)；再生黏膜的厚度、微血管數(shù)卻低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，表明Asp能夠降低潰瘍的愈合質(zhì)量。而阿司匹林組(8只中的

11、3只)沒有復(fù)發(fā)潰瘍部位的黏膜結(jié)構(gòu)與正常黏膜相似，表明愈合質(zhì)量好的胃黏膜可以有效地抵抗Asp的損傷作用。這可以解釋為什么復(fù)發(fā)在不同時(shí)間出現(xiàn)，并且多出現(xiàn)在原來的部位。 4．3．Asp對(duì)胃黏膜PGE<,2>和胃酸分泌的影響：PGE<,2>能夠抑制胃酸分泌，調(diào)節(jié)胃粘液和碳酸氫鹽的分泌、擴(kuò)張血管、增加GMBF、促進(jìn)胃粘膜上皮細(xì)胞更新、增殖。本研究顯示，阿司匹林組的PGE<,2>含量低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組，表明Asp 能夠抑制PGE<,

12、2>的產(chǎn)生。胃酸過多可以損傷黏液一碳酸氫鹽屏障和粘膜屏障。本研究還顯示，阿司匹林組的胃液量高于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組，而胃液的pH卻低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組，表明Asp能夠增加胃酸分泌，由此可知Asp抑制了PGE<,2>的產(chǎn)生，導(dǎo)致胃酸分泌增加。 4．4．Asp對(duì)COX表達(dá)的影響：COX是前列腺素合成的限速酶。本研究顯示，COX-2的mRNA和蛋白在潰瘍和復(fù)發(fā)時(shí)大量表達(dá)，PGE<,2>理應(yīng)增多，但在本研究中顯示PGE<,2>在

13、阿司匹林組減少，因此，阿司匹林能夠抑制COX的活性而不抑制其表達(dá)。 4．5．Asp對(duì)胃黏液、GMBF和ET的影響：胃黏液和HCO<,3><'->構(gòu)成了黏液-碳酸氫鹽屏障，是防御有害因子的第一道防線。GMBF可以為黏膜細(xì)胞提供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維持黏液-碳酸氫鹽屏障和粘膜屏障的功能。粘膜屏障是防御有害因子的第二道防線。ET具有強(qiáng)烈的縮血管作用。本研究顯示阿司匹林組的胃黏液和GMBF都低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，而ET高

14、于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，表明Asp能夠減少胃黏液和GMBF，增加ET。GMBF的減少可能是PGE<,2>減少和ET增加的結(jié)果。GMBF減少會(huì)導(dǎo)致胃粘膜缺血，引起粘液和碳酸氫鹽減少，胃粘膜屏障功能減弱，潰瘍復(fù)發(fā)。 4．6．Asp對(duì)生長(zhǎng)因子的影響：EGF具有抑制胃酸分泌、促進(jìn)胃黏膜上皮分化、增殖和增加GMBF的作用。本研究顯示，阿司匹林組的EGF低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，因此，Asp引起胃黏膜EG

15、F減少，導(dǎo)致了胃酸分泌增多、GMBF減少，愈合質(zhì)量降低，進(jìn)而導(dǎo)致復(fù)發(fā)。TGF-α在維持胃腸道粘膜更新和完整性方面有重要作用。本研究顯示，阿司匹林組的TGF-α低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，因此，Asp引起胃黏膜TGF-α減少，降低了黏膜的更新能力，促進(jìn)了復(fù)發(fā)。VEGF能夠促進(jìn)血管的形成。本研究顯示，阿司匹林組的VEGF低于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(19<0.01)，因而血管生成減少，GMBF減少，促進(jìn)了潰瘍的復(fù)發(fā)。

16、4．7．Asp對(duì)炎癥因子的影響：TNF-α和IL-1β是重要的致炎因子。本研究顯示，阿司匹林組的TNF-α和IL-1β高于禁食對(duì)照組和鹽水對(duì)照組(P<0.01)，表明Asp能夠誘導(dǎo)TNF-α和IL-1β的增加，促進(jìn)了炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致了復(fù)發(fā)。 5．結(jié)論 Asp能夠誘導(dǎo)潰瘍復(fù)發(fā)，機(jī)制是：Asp抑制COX的活性，導(dǎo)致PGE<,2>生成減少，胃酸分泌增多，GMBF減少；GMBF減少，黏液生成減少，粘膜更新能力下降；ET增多，胃血管