替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道HSPs誘導(dǎo)效應(yīng)及其應(yīng)激保護(hù)作用初步研究.pdf

1、斜帶石斑魚(yú)是我國(guó)重要的高檔海水養(yǎng)殖魚(yú)類，高溫脅迫是影響其生長(zhǎng)和成活的關(guān)鍵環(huán)境因素。消化道是斜帶石斑魚(yú)高溫應(yīng)激的主要靶器官之一，而熱休克蛋白（Heat Shock Protein,HSP）在細(xì)胞應(yīng)激損傷修復(fù)和抑制細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮重要功能，能有效保護(hù)機(jī)體抵御應(yīng)激損傷。替普瑞酮作為HSPs誘導(dǎo)劑，其在人類、大鼠和畜禽胃腸黏膜損傷的保護(hù)已有相關(guān)研究和應(yīng)用，而至今在水產(chǎn)動(dòng)物中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文通過(guò)拌料投喂不同劑量替普瑞酮分析其對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道組

2、織的影響，為今后斜帶石斑魚(yú)的養(yǎng)殖業(yè)提供理論依據(jù)。
　　研究的內(nèi)容主要包括以下四個(gè)部分：
　?。?）替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的影響
　　通過(guò)拌料投喂，觀察斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的數(shù)據(jù)，研究不同劑量的替普瑞酮（100 mg/Kg、200 mg/Kg、400 mg/Kg）對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示：與對(duì)照組（0 mg/Kg）相比，低劑量組（100 mg/Kg）和中劑量組（200 mg/Kg）的谷草轉(zhuǎn)氨酶

3、、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和總膽紅素水平差異不顯著（p>0.05），高劑量組（400 mg/Kg）斜帶石斑魚(yú)谷草轉(zhuǎn)氨酶和總膽汁酸的水平升高顯著，達(dá)到411.6±50.1（μmol/L）和24.8±5.1（μmol/L）。結(jié)果表明，低劑量（100 mg/Kg）和中劑量（200 mg/Kg）的替普瑞酮飼料添加量對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能指標(biāo)沒(méi)有影響，而高劑量（400 mg/Kg）的替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)肝臟功能有損傷，證明有一定的毒性。
　?。?）替普瑞

4、酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道熱激誘導(dǎo)損傷保護(hù)的組織學(xué)分析
　　通過(guò)消化道組織切片，觀察了斜帶石斑魚(yú)投喂替普瑞酮以及熱激損傷后的腸道組織學(xué)變化。結(jié)果顯示，處理組石斑魚(yú)腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層的厚度明顯的高于對(duì)照組。替普瑞酮投喂15 d后，各處理組石斑魚(yú)腸道黏膜絨毛長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層的厚度完全不同；低劑量組（100 mg/Kg）對(duì)腸道黏膜絨毛長(zhǎng)度和寬度的生長(zhǎng)穩(wěn)定性好，中劑量組（200 mg/Kg）對(duì)腸道肌肉層的厚度的穩(wěn)定性好。

5、提升水溫8℃進(jìn)行高溫應(yīng)激2 h，應(yīng)激后0 h與48 h對(duì)比，處理組的腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層厚度前后較穩(wěn)定。組織學(xué)觀察顯示，替普瑞酮不僅能夠促進(jìn)腸道黏膜絨毛的長(zhǎng)度、寬度和腸道肌肉層厚度的生長(zhǎng)，還能夠維持腸道組織學(xué)生長(zhǎng)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，中劑量組（200 mg/Kg）替普瑞酮對(duì)于腸道絨毛和肌肉層穩(wěn)定性效果最好。
　?。?）替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道的HSPs熱激誘導(dǎo)效應(yīng)
　　通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定結(jié)果觀察，發(fā)現(xiàn)添加不

6、同劑量的替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道的HSPs的熱激誘導(dǎo)效應(yīng)明顯。結(jié)果顯示，高溫應(yīng)激后0 h和48 h，處理組誘導(dǎo)的HSP70、HSP60和HSP90的表達(dá)明顯的高于對(duì)照組。HSP70表達(dá)的水平在160ng/L左右，HSP60在25ng/L左右，HSP90在14ng/L左右，可見(jiàn)HSP70的熱激水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)的高于HSP60的熱激水平和HSP90的熱激水平；胃中的 HSPs表達(dá)水平高于腸道。結(jié)果表明，替普瑞酮能夠提高魚(yú)體消化道HSP70的表達(dá)，

7、而較高的初始表達(dá)水平可提高隨后熱應(yīng)激的抵御能力，表現(xiàn)為對(duì)熱激的敏感性降低；且熱激恢復(fù)后各處理組HSPs仍維持高表達(dá)水平。
　?。?）替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道相關(guān)免疫指標(biāo)的影響
　　通過(guò)免疫酶活力的觀察，發(fā)現(xiàn)添加替普瑞酮對(duì)斜帶石斑魚(yú)消化道免疫酶活力有顯著的影響。金屬硫蛋白呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，6 h最低，低劑量組（100 mg/Kg）下降較緩慢。細(xì)胞色素C水平呈現(xiàn)先高后低的趨勢(shì)，而且峰值以6h為主，與金屬硫蛋白的變化水平相