VEGF165基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療兔激素性股骨頭缺血性壞死.pdf

1、目的：探討使用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將VEGF165基因轉(zhuǎn)染入造模后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中并結(jié)合自體骨移植治療兔激素性股骨頭缺血性壞死。
　　方法：
　　1.成年新西蘭大白兔（18～23周齡）42只，體重2.5±0.5kg。每只使用馬血清10ml/kg，經(jīng)兔耳緣靜脈注射一次，間隔兩周后再注射一次。兩周后肌肉注射醋酸潑尼松龍8mg/kg，間隔一天注射一次，共5次。以最后一次注射激素4周后，隨機(jī)處死2只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢查造模情況。

2、　　2.選取脛骨近端外側(cè)，無(wú)菌條件下抽取5ml骨髓液，使用密度為1.073g/ml的Percoll分離液分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。檢測(cè)造模后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖水平，并進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察。
　　3.根據(jù)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)原則將造模后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分A組（股骨頭不作處理）；B組（行髓心減壓+自體骨移植）；C（行髓心減壓+骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+自體骨移植）；D（行髓心減壓+腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+自體骨移植）。每組10只實(shí)驗(yàn)

3、動(dòng)物。取髖關(guān)節(jié)后外側(cè)切口暴露股骨頭進(jìn)行髓心減壓，鉆孔直徑2mm，深4mm。分別對(duì)各組進(jìn)行治療。
　　4.術(shù)后3周處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行病理學(xué)、免疫組織化學(xué)檢查及WesternBlot檢測(cè)股骨頭內(nèi)VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.攜帶有VEGF165基因的腺病毒可以轉(zhuǎn)染從造模后動(dòng)物模型體內(nèi)提取的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并可以表達(dá)目的蛋白。表達(dá)目的蛋白的量較正常細(xì)胞少，差別據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)各組進(jìn)行病理學(xué)、免

4、疫組織化學(xué)及WesternBlot檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)：A組：空骨陷窩率（24.76±1.20％）；軟骨下血管（2.27±0.84個(gè)）；VEGF平均灰度值（70.78±2.95）；VEGF陽(yáng)性面積百分比（8.72±1.83%）；股骨頭內(nèi)VEGF的相對(duì)濃度（0.314±0.125）。B組：空骨陷窩率（21.82±1.78%）；軟骨下血管（2.85±0.85個(gè)）；VEGF平均灰度值（61.07±2.91）；VEGF陽(yáng)性面積百分比（14.82±1.4

5、4%）；股骨頭內(nèi)VEGF的相對(duì)濃度（0.664±0.090）。C組：空骨陷窩率（17.52±1.39%）；軟骨下血管（4.26±1.03個(gè)）；VEGF平均灰度值（57.50±3.27）；VEGF陽(yáng)性面積百分比（17.61±1.79%）；股骨頭內(nèi)VEGF的相對(duì)濃度（0.863±0.079）。D組：空骨陷窩率（12.92±1.79%）；軟骨下血管（7.19±1.72個(gè)）；VEGF平均灰度值（49.20±1.91）；VEGF陽(yáng)性面積百分比（2

6、1.99±2.14%）；股骨頭內(nèi)VEGF的相對(duì)濃度（1.029±0.097）。通過(guò)比較我們發(fā)現(xiàn)D組在軟骨下血管、VEGF陽(yáng)性面積百分比、股骨頭內(nèi)VEGF的相對(duì)濃度高于其他各組；在VEGF平均灰度值、空骨陷窩率低于其他各組，并且各組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明D組的治療具有一定效果。
　　結(jié)論：
　　1.兔激素性股骨頭缺血性壞死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以作為基因治療的受體細(xì)胞。
　　2.這種轉(zhuǎn)染后的骨髓間充值干