豬流感病毒抗體水平監(jiān)測、神經(jīng)氨酸酶基因的克隆與原核表達載體初步的構(gòu)建.pdf

1、為了解廣西豬群中豬流感病毒抗體水平，本調(diào)查主要采用血球凝集抑制(HI)試驗和ELISA相結(jié)合的血清學(xué)方法，從廣西10個市11個規(guī)模種豬場(均未進行SIV免疫)采集種公豬、后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬399份血清，從小型豬場和散養(yǎng)戶采集不同年齡階段豬的血清291份，進行了H1和H3亞型豬流感病毒的抗體檢測。用HI方法和ELISA對344份進行了檢測，結(jié)果表明：HI方法檢測出陽性為175份，陽性率分別為50.87％(175/344)；ELISA法檢測

2、出陽性為195份，陽性率分別為56.68％(195/344)；HI方法與ELISA方法的符合率達到89.74％(175/195)，但兩種檢測方法檢出率差異不顯著(P>0.05)；說明改良的HI試驗作為檢測方法，可以用于監(jiān)測非免疫豬群的流感病毒感染情況。11個規(guī)模種豬場均受到不同程度的H1和H3亞型SIV感染，H1、H3和H1+H3亞型流感病毒抗體平均陽性率為60.5％、42％和21.65％；而其它小型豬場和散養(yǎng)戶豬血清的H1、H3和Hl

3、+H3亞型流感病毒抗體陽性率相對較低，別為31.31％、34.34％、7.1％。2006至2007年，本實驗同時在全區(qū)14個市130個疑似豬流感病毒(SIV)感染的發(fā)病豬采集251份組織病料(肺、脾、淋巴結(jié))和在4個市8個豬場采集155份病料棉拭子，提取RNA，用核蛋白(NP)引物進行RT-PCR檢測SIV，將檢出陽性病料，結(jié)果：在251份和155份中分別檢測出72份和11份為陽性。由于上述豬場的未使用SIV疫苗的免疫，因此，這些抗體只

4、能理解是由野毒株感染產(chǎn)生的。這就表明目前，廣西豬群中普遍受H1和H3亞型SIV感染，因此我們要嚴密監(jiān)視流感病毒在豬群中的發(fā)展動向，防止流感的大流行。 本研究同時對神經(jīng)酸酶(NA)核苷酸序列設(shè)計引物，進行RT-PCR擴增NA，將擴增獲得的NA基因克隆與PMD-18載體，并測序，然后將該基因插入PET32中構(gòu)建原核表達載體，最后將重組質(zhì)粒構(gòu)建的表達載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞BL21，酶切鑒定后對其序列分析。結(jié)果：擴增的SIV NA基因片段大