外源性枯草芽孢桿菌在水體和斑馬魚(yú)腸道的定植情況及其對(duì)所處環(huán)境菌群的影響.pdf

1、益生菌的適應(yīng)性對(duì)其在養(yǎng)殖水體和魚(yú)類腸道中的存活和定植以及生物調(diào)控功能的發(fā)揮具有重要意義。芽孢桿菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛應(yīng)用的益生菌，然而它在養(yǎng)殖水體和魚(yú)類腸道中的生存動(dòng)態(tài)以及影響仍然不清楚。在這項(xiàng)研究中，我們采用帶有綠色熒光蛋白標(biāo)記基因的載體pGFP315導(dǎo)入來(lái)自草魚(yú)腸道的枯草芽孢桿菌并篩選出實(shí)驗(yàn)用菌Bst51，先將重組細(xì)菌投入設(shè)計(jì)好的實(shí)驗(yàn)養(yǎng)殖水體中并進(jìn)行定時(shí)取樣測(cè)定各項(xiàng)水質(zhì)指標(biāo)，然后采用細(xì)菌計(jì)數(shù)、熒光顯微鏡觀察、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性凝膠梯

2、度電泳等方法探究外源性枯草芽孢桿菌在水體和斑馬魚(yú)腸道中的定植情況以及對(duì)其中菌群的影響。結(jié)果表明:
　　(1)通過(guò)構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白標(biāo)記技術(shù)以及進(jìn)一步的篩選和馴化，我們得到了用于本次實(shí)驗(yàn)的枯草芽孢桿菌重組菌株Bst51;
　　(2)通過(guò)測(cè)定溶氧量(DO)、 pH、總氮、總磷、硝態(tài)氮、亞硝態(tài)氮和氨氮等水質(zhì)指標(biāo)并進(jìn)行顯著性分析發(fā)現(xiàn)，本研究所獲得的枯草芽孢桿菌Bst51菌株在改善水質(zhì)方面效果并不明顯，除了長(zhǎng)期影響總氮指標(biāo)和短期內(nèi)影

3、響DO值和亞硝態(tài)氮指標(biāo)外對(duì)其余指標(biāo)并無(wú)顯著影響。
　　(3)細(xì)菌計(jì)數(shù)和斑馬魚(yú)消化道各部分樣品切片的熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示，在只施用一次時(shí)，水體中Bst51的濃度下降到初始濃度的1/10并于24h后保持穩(wěn)定，證明Bst51菌株在濃度高于103 CFU/mL時(shí)能在養(yǎng)殖水體中存活。經(jīng)過(guò)一次飼喂后斑馬魚(yú)腸道中Bst51細(xì)胞的濃度有小幅下降并最終保持在5×106 CFU/g左右，證明Bst51細(xì)胞在濃度高于109 CFU/mL時(shí)能在斑馬魚(yú)腸