2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、內(nèi)毒素休克(endotoxic shock,ES)是臨床各科常見的危重病理過程,內(nèi)毒素休克及其合并癥多器官功能障礙綜合癥是ICU患者最常見的死亡原因。在內(nèi)毒素休克的發(fā)病早期,體循環(huán)血管舒張、平均動(dòng)脈壓(meanarterial pressure,MAP)進(jìn)行性降低是其特征性病理變化。內(nèi)毒素的主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及其誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子可引起血管調(diào)控超氧化物岐化酶(superoxide di

2、smutase,SOD)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)的異常表達(dá),氧自由基、一氧化氮(nitric oxide,NO)等生成增多,干擾血管的調(diào)節(jié)機(jī)制,可能是ES早期血壓降低的重要原因。 鑒于VSMC是血管的功能細(xì)胞,本課題在我室系列研究的基礎(chǔ)上,以體外培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(thoracic aortic smooth musclecells,TASMCs)為

3、研究對(duì)象,擬觀察CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)大鼠TASMCsiNOS和不同類型SOD表達(dá)的影響及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,以及CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)大鼠TASMCs 阿片受體表達(dá)的影響及其在受體水平的交互作用,以進(jìn)一步探討CCK-8緩解ES大鼠血管功能障礙的分子機(jī)制。 1 CCK-8抑制LPS誘導(dǎo)大鼠TASMCs iNOS表達(dá)的受體機(jī)制研究1.1 CCK受體在大鼠TASMCs中的表達(dá)及LPS的影響 目的:為了探討CCK受體在大鼠TASM

4、Cs中的表達(dá)及不同劑量及不同時(shí)間LPS對(duì)CCK受體表達(dá)的影響。 方法:用貼塊法培養(yǎng)大鼠TASMCs,給予LPS(0.1mg/L)孵育細(xì)胞不同時(shí)間,采用RT-PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CCK-AR和CCK-BR的基因和蛋白表達(dá)及LPS對(duì)其表達(dá)的影響。數(shù)據(jù)用x±S表示,用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用ANOVA及LSD進(jìn)行組間比較及兩兩比較,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論:在體外培養(yǎng)的大鼠TASMCs中存在著C

5、CK-AR和CCK-BRmRNA及蛋白的表達(dá);LPS可誘導(dǎo)其表達(dá)上調(diào)。 本部分將主要觀察CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)TASMCs iNOS表達(dá)及CCK-AR拮抗劑CR-1409和CCK-BR拮抗劑CR-2945對(duì)其的影響,以闡明CCK-8的抗休克作用機(jī)制。 方法:培養(yǎng)大鼠TASMCs,在加入或不加入CCK-8和/或CCK受體拮抗劑CR-1409/CR-2945 的情況下,給予LPS刺激細(xì)胞16h,用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞iN

6、OS mRNA的表達(dá);Western blot技術(shù)檢測(cè)胞漿iNOS蛋白表達(dá),以光密度值表示其相對(duì)含量。數(shù)據(jù)用x±S表示,用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用ANOVA及LSD進(jìn)行組間比較及兩兩比較,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論:LPS可增加TASMCs中iNOS mRNA及蛋白的表達(dá);CCK-8抑制了LPS的這種作用; CCK-8的這種抑制作用是由其靶細(xì)胞膜上特異性受體介導(dǎo)的,且CCK-AR的作用略強(qiáng)于CCK-BR。

7、 2 CCK-8抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠TASMCs SOD表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制初探 2.1 PTK通路參與CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠TASMCs NF-kB活性的影響 目的:NF-kB是內(nèi)毒素休克過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子,蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)作為NF-kB的上游蛋白,介導(dǎo)細(xì)胞多種不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。本部分主要研究CCK-8是否影響LPS誘導(dǎo)TASMCs中NF-kB活性變

8、化及PTK是否參與這一過程,以闡明CCK-8的抗休克信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 方法:培養(yǎng)大鼠TASMCs,在加入或不加入CCK-8和/或PTK特異性拮抗劑Genistein的情況下,用LPS刺激細(xì)胞一定時(shí)間,用電泳遷移率改變分析(EMSA)方法檢測(cè)細(xì)胞NF-kB活性變化;用Western blot技術(shù)分析細(xì)胞胞漿中IkB蛋白的表達(dá)水平;用免疫細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)觀測(cè)P65蛋白的核轉(zhuǎn)位。數(shù)據(jù)用x±s表示,用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用

9、ANOVA及LSD進(jìn)行組間比較及兩兩比較,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論:CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)的NF-kB活性增加,而PTK參與了這一過程,這可能是CCK-8抗內(nèi)毒素休克作用的上游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制之一。 2.2 CCK-8抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠TASMCs SOD表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 目的:超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)是機(jī)體清除自由基的重要抗氧化酶,可清除超氧陰離子;而內(nèi)毒

10、素休克的發(fā)病早期,體循環(huán)血管舒張、平均動(dòng)脈壓進(jìn)行性降低與氧自由基的生成增多密切相關(guān)。我們的研究表明,CCK-8具有一定的抗內(nèi)毒素休克作用,可增強(qiáng)SOD的活性,翻轉(zhuǎn)LPS導(dǎo)致的SOD活性降低;抑制LPS誘導(dǎo)的Cu-ZnSOD及Mn SOD mRNA表達(dá)的增高。 本試驗(yàn)第二部分(1)已證實(shí)CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)的NF-kB活性增加,且PTK參與了這一過程。然而,CCK-8抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠TASMCs SOD表達(dá)的的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)

11、制尚未闡明。鑒于NF-kB是參與LPS誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自由基的重要轉(zhuǎn)錄因子,為進(jìn)一步闡明CCK-8抗內(nèi)毒素休克效應(yīng)的分子機(jī)制,本部分內(nèi)容主要觀察Gen作用于CCK-8和LPS共同孵育的TASMCs后,Cu-Zn SOD及Mn SOD mRNA表達(dá)的變化。 方法:培養(yǎng)大鼠TASMCs,在加入或不加入CCK-8和/或Genistein的情況下,用LPS刺激細(xì)胞一定時(shí)間,用半定量RT-PCR檢測(cè)SODmRNA表達(dá)。數(shù)據(jù)用x±S表示,用SP

12、SS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用ANOVA及LSD進(jìn)行組間比較及兩兩比較,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論:CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)的Cu-Zn SOD及Mn SOD mRNA表達(dá)的增高,且PTK介導(dǎo)了這一過程,這可能是CCK-8抗內(nèi)毒素休克作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制之一。 本部分內(nèi)容主要觀察PKC拮抗劑白屈菜赤堿(chelerythrine,CHE)、嗎啡作用于CCK-8和/或LPS孵育的 TASMCs后к阿片受體mRN

13、A表達(dá)變化,以闡明CCK-8調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)大鼠 TASMCs к阿片受體表達(dá)的分子機(jī)制。 方法:培養(yǎng)大鼠。TASMCs,在加入或不加入CCK-8和/或CHE、嗎啡的情況下,用LPS刺激細(xì)胞16h,用半定量RT-PCR檢測(cè)к阿片受體mRNA的表達(dá)。數(shù)據(jù)用x±s表示,用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用ANOVA及LSD進(jìn)行組間比較及兩兩比較,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論:CCK-8可通過PKC抑制LPS誘導(dǎo)大鼠

14、TASMCs к阿片受體mRNA表達(dá)的增高,這可能是CCK-8抗內(nèi)毒素休克作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制之一。 小結(jié) 本研究從受體、轉(zhuǎn)錄因子、與ES相關(guān)因子的基因及蛋白表達(dá)多個(gè)層次比較系統(tǒng)地研究了CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo) TASMCs的調(diào)節(jié)作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,取得以下新發(fā)現(xiàn): 1.CCK-AR和CCKoBR在大鼠 TASMCs 中均有表達(dá);LPS可明顯誘導(dǎo)其表達(dá)上調(diào),其中CCK-BR的相對(duì)表達(dá)量高于CCK-AR。 2

15、.CCK-8可劑量依賴性地抑制LPS引起大鼠TASMCs iNOS表達(dá)的增加,此作用是由其受體介導(dǎo)的。 3.CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)大鼠TASMCs NF-кB的活化抑制作用,且PTK參與了此過程。 4.CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)大鼠TASMCs的Cu-ZnSOD、MnSOD mRNA表達(dá),LPS-PTK-NF-kB-SOD通路可能是其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之一。 5.CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)大鼠 TASMCs 阿片受體基因表

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