雙黃連注射液對(duì)大鼠CYP的影響.pdf

1、細(xì)胞色素P450(cytochrome P-450,CYP)是一種混合功能氧化酶,可催化體內(nèi)多種反應(yīng),CYP酶參與體內(nèi)75％~80％的藥物代謝,清除臨床上所用65％~70％的藥物。奧美拉唑(Omeprazole,OPZ)是一種新型、高效、低毒的抗消化性潰瘍藥。研究表明,在人體內(nèi)奧美拉唑主要經(jīng)CYP系統(tǒng)代謝,生成10余種代謝產(chǎn)物。在大鼠體內(nèi),奧美拉唑主要經(jīng)過CYP1A1、CYP3A2和CYP2D1代謝,生成5-羥基奧美拉唑。本研究選擇奧美

2、拉唑作為參照,考查雙黃連注射液對(duì)大鼠CYP酶的影響。雙黃連注射液主要成分為金銀花、黃芩、連翹,為純中藥復(fù)方制劑,質(zhì)控成分為黃芩苷,主要用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽及多種上呼吸道感染病癥,已成為中醫(yī)藥治療呼吸道感染性疾病的首選藥物之一。
　　本課題主要研究雙黃連注射液及其質(zhì)控成分黃芩苷對(duì)CYP的影響,預(yù)測(cè)雙黃連注射液與其他藥物聯(lián)用時(shí)可能產(chǎn)生的代謝性藥物相互作用,為臨床合理用藥提供參考。
　　材料和方法:1.動(dòng)物分組和給藥方案大

3、鼠隨機(jī)分成2組(雙黃連注射液給藥組與對(duì)照組),每組各9只,每天分別尾靜脈注射給予雙黃連注射液10.42mL·kg-1和同等劑量生理鹽水,連續(xù)給藥7天。2.肝微粒體制備及蛋白質(zhì)含量測(cè)定雙黃連注射液給藥組和對(duì)照組大鼠在末次給藥后,禁食24h以上(不限飲水),分別斷頭處死,立即取出肝臟,用鈣沉淀法制備肝微粒體,Bradford法測(cè)定微粒體蛋白濃度。3.肝微粒體體外溫孵系統(tǒng)肝微粒體體外溫孵系統(tǒng)的組成為:肝微粒體,NADPH,OPZ,磷酸鹽緩沖液

4、(pH7.4)。溫孵系統(tǒng)總體積為200μL。肝微粒體蛋白濃度為0.2mg·mL-1,NADPH的終濃度為1mmol·L-1,OPZ的終濃度為4μmol·L-1,用0.1mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH7.4)定容至終體積。37℃水浴中預(yù)孵5min后加入NADPH開始反應(yīng)。4.樣品處理及色譜條件孵育20min后,加入200μl冰冷的乙腈,渦旋30s終止反應(yīng)。12000rpm離心10min,取30μl上清液進(jìn)樣分析。色譜條件:色譜柱5μm

5、DiamonsiL C18柱(4.6mm×200mm);流動(dòng)相:甲醇:乙腈:0.1mol·L-1乙酸銨溶液=10:35:55(v:v:v);柱溫:25℃;流速:1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):302nm。5.雙黃連注射液對(duì)大鼠肝微粒體CYP的體外影響實(shí)驗(yàn)將不同體積雙黃連注射液加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,經(jīng)肝微粒體溫孵系統(tǒng)反應(yīng)及樣品處理后,取30μl注入高效液相色譜儀進(jìn)樣分析。以O(shè)PZ的轉(zhuǎn)化程度(Turnover,TR)作為酶活性的指

6、標(biāo),評(píng)價(jià)體外實(shí)驗(yàn)中雙黃連注射液對(duì)大鼠CYP活性的影響。6.黃芩苷對(duì)大鼠肝微粒體CYP的體外影響實(shí)驗(yàn)將不同濃度黃芩苷加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)及樣品處理后,取30μl注入高效液相色譜儀進(jìn)樣分析。評(píng)估黃芩苷對(duì)CYP的影響,考察雙黃連注射液對(duì)CYP的影響與其質(zhì)控成分黃芩苷的關(guān)系。7.雙黃連注射液對(duì)大鼠肝微粒體CYP的體內(nèi)影響實(shí)驗(yàn)HPLC法分別測(cè)定對(duì)照組和雙黃連注射液給藥組大鼠肝微粒體溫孵系統(tǒng)中OPZ的濃度,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析

7、兩組酶活性的差異,P<0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),評(píng)估體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中雙黃連注射液對(duì)CYP的影響。結(jié)果1.雙黃連注射液對(duì)大鼠肝微粒體CYP的體外影響實(shí)驗(yàn)將雙黃連注射液加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,濃度分別為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3.0μl·100μl-1時(shí),TR值分別為:477.07±14.13、324.15±13.68、258.74±12.96、201.32±21.60、100.89±4.68、84.84±10.13、68.67±2

8、1.76pmol·minl-1·mg-1。結(jié)果表明,CYP的活性隨雙黃連注射液的濃度的升高而降低。IC50為0.96μl·100μl-1。2.黃芩苷對(duì)大鼠肝微粒體CYP體外影響實(shí)驗(yàn)將黃芩苷加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,濃度分別為0、6、10、15、20、25、30、35mg·mL-1時(shí),CYP的TR值分別為:419.47±27.52、298.89±9.20、279.55±16.09、211.21±10.91、163.31±63.54、1

9、15.71±19.56、102.29±22.24、21.81±3.50pmol·min-1·mg-1。
　　結(jié)果表明,CYP的活性隨黃芩苷的濃度的升高而降低。IC50為12.89μg·100μl-1。3.雙黃連注射液對(duì)大鼠肝微粒體CYP的體內(nèi)影響實(shí)驗(yàn)用HPLC法測(cè)定對(duì)照組和給藥組大鼠肝微粒體溫孵系統(tǒng)中OPZ的含量。對(duì)照組和給藥組大鼠TR值分別是298.96±13.63 pmol·min-1·mg-1和204.73±23.62 pm