膀胱癌組織gp96—肽復(fù)合物的純化及抗原肽的生物質(zhì)譜分析研究.pdf

1、目的：膀胱癌是一種常見的泌尿系惡性腫瘤，目前雖然在早期診斷、手術(shù)治療及術(shù)后膀胱灌注治療等方面取得了一定的進(jìn)展，但是，作為一種惡性腫瘤，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是其治療的難點(diǎn)。人們?cè)噲D采用多方面的綜合治療措施以減少膀胱癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其中，研發(fā)出一種有效的腫瘤疫苗是一個(gè)重要的努力方向。從腫瘤組織中純化出gp96-肽復(fù)合物作為一種特異性腫瘤疫苗是目前一個(gè)研究熱點(diǎn)，其進(jìn)展相當(dāng)迅速。不過，雖然從患者癌組織中純化的gp96-肽復(fù)合物可作為患者特異性的治療性疫

2、苗，但是，由于組織來源的限制以及純化工序的繁雜，難以進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。目前已證實(shí)，在gp96-肽復(fù)合物中起腫瘤免疫作用的是抗原肽而不是gp96。因此，針對(duì)gp96結(jié)合的短肽中特異性抗原肽的分析和鑒定是疫苗研制過程中有待于進(jìn)一步深入研究的重要問題。這些研究對(duì)尋找一種有效的腫瘤肽疫苗和人工化生產(chǎn)gp96-抗原肽復(fù)合物疫苗具有積極的意義。我們通過純化膀胱癌組織中的gp96-肽復(fù)合物，并測(cè)定、分析與gp96結(jié)合的多肽的氨基酸序列，為今后制備腫瘤肽

3、疫苗和體外組裝gp96-抗原肽復(fù)合物疫苗提供理論基礎(chǔ)。 方法：在第一部分中，利用硫酸銨沉淀法結(jié)合親和層析和離子交換層析技術(shù)從手術(shù)中獲取的10例膀胱癌組織中純化出gp96-肽復(fù)合物，利用gp96單克隆抗體和western-blot技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定并應(yīng)用BCA法對(duì)其濃度進(jìn)行測(cè)定。 在第二部分中，首先利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀測(cè)定與gp96結(jié)合的多肽的分子量，并利用毛細(xì)管電噴霧四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定其基酸序列

4、。最后登陸http：//www.expasy.org/tools/blast/查詢多肽的來源。結(jié)果：在第一部分中，(1)利用硫酸銨沉淀法結(jié)合親和層析和離子交換層析技術(shù)可以從膀胱癌組織中純化出gp96-肽復(fù)合物，并為western-blot所證實(shí)； (2)每克膀胱癌組織可獲得20-40微克的gp96-肽復(fù)合物。在第二部分中，(1)與gp96結(jié)合的多肽分子量范圍為860.86-3473.05Da之間；(2)測(cè)定出其中兩個(gè)多肽的氨基酸