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文檔簡介
1、牡蠣(oyster),俗稱海蠣子,是我國四大養(yǎng)殖貝類之一,也是我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的第一批藥用兼保健的功能性食品。牡蠣中蛋白質(zhì)的含量較高,是制備生物活性肽的良好原料,目前對牡蠣多肽的研究雖正處于初級階段,但已顯示出了良好的發(fā)展前景。因此本文對特定產(chǎn)地的牡蠣多肽進行了分離純化,研究了其理化性質(zhì)及部分藥理活性,為該類多肽的研究開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
自由基是指帶有不配對電子的原子、原子團或分子。諸多醫(yī)學(xué)研究證明,適量的自由基在
2、免疫反應(yīng)、細胞分化和凋亡等過程中起著重要的作用,然而過量的自由基又是導(dǎo)致心血管疾病、癌癥、衰老等許多疾病的原因。隨著對自由基研究的不斷深入,氧化應(yīng)激損傷和抗氧化保護作用備受關(guān)注,天然生物小分子物質(zhì)分子量小、易吸收、活性高等特點迅速成為研究的熱點之一??寡趸嚯淖鳛槠渲幸活?,具有抑制生物大分子過氧化和清除體內(nèi)自由基的功能,而且現(xiàn)在大部分抗氧化多肽是通過蛋白酶在溫和條件下水解蛋白質(zhì)獲得,使用安全性較高。此外諸多研究證明很多海洋生物種提取的活
3、性肽具有免疫調(diào)節(jié)功能,而促脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗是檢測此免疫功能的體外試驗方法之一,這主要是因為脾臟是機體內(nèi)最大的外周免疫器官,也是T淋巴細胞、B淋巴細胞定居和接受抗原刺激產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場所,并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著密切關(guān)系。在此理論基礎(chǔ)之上,本文對制得的牡蠣多肽進行了體外抗氧化活性和免疫調(diào)節(jié)的研究。
然而,蛋白多肽類藥物往往在上消化道被酶降解,生物利用度很低,因此大多采用注射給藥,給患者帶來了很多不便。結(jié)腸中蛋
4、白水解酶含量很低,根據(jù)這一生理特性,口服結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)(oralcolon-specificdrugdeliverysystem,OCDDS)日益受到人們的關(guān)注。OCDDS是通過多種制劑技術(shù)使藥物口服后,在胃及小腸內(nèi)不釋放,只有到達回盲部或結(jié)腸部位才定位釋放藥物的一種新型藥物控釋系統(tǒng),其主要意義有①治療結(jié)腸局部疾病而避免藥物引起的全身性副作用,如結(jié)腸炎、結(jié)腸癌、結(jié)腸性寄生蟲病等。②利用結(jié)腸對藥物擇時吸收治療如晨僵、哮喘等時辰性疾病。③
5、利用結(jié)腸吸收避免胃腸道對多肽蛋白類藥物的破壞而提高療效。所以O(shè)CDDS不僅有重要的臨床意義,也有廣闊的市場前景。因此本文根據(jù)口服結(jié)腸定位系統(tǒng)原理,制備了該多肽的結(jié)腸定位給藥微丸,把藥物直接運送到結(jié)腸部位釋放,避免了通過上消化道被酶降解,而且多肽類藥物在小腸末端吸收很好,為該類藥物的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
總之,本課題將通過酶解法從山東榮成產(chǎn)牡蠣中制得生物活性肽經(jīng)有機溶劑分級沉淀和交聯(lián)葡聚糖凝膠色譜分離純化,獲得不同分子量的活
6、性肽。在進行了檢查方法的建立及理化性質(zhì)的測定基礎(chǔ)上,研究了不同分子量的牡蠣多肽抗氧化活性及免疫調(diào)節(jié)作用,最后對其進行了口服結(jié)腸定位制劑的研究。
本研究取得的結(jié)果和結(jié)論有以下幾個方面:
1.利用酶解法制得牡蠣多肽,經(jīng)有機溶劑分級沉淀和交聯(lián)葡聚糖凝膠色譜分離純化,獲得相對較純的三種牡蠣多肽A1、A2和A3。
2.通過對比研究,建立有效、準(zhǔn)確的牡蠣多肽的檢查方法。
3.通過氨基酸分析,了
7、解牡蠣多肽的氨基酸組成。
4.運用紅外光譜(IR)和圓二色譜(CD)預(yù)測了A1、A2和A3的二級結(jié)構(gòu)。
5.測定了三種牡蠣多肽部分理化性質(zhì)。三種牡蠣多肽的平均分子量分別約為8.3kDa、6.5kDa和3.5kDa;等電點約為:pH6.4:蛋白含量分別為:69.633%、42.886%和81.849%;多糖含量分別為:3.52%、28.74%和2.88%。
6.牡蠣多肽體外抗氧化活性研究結(jié)果表明:
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