烏骨雞黑色素的測(cè)定及其理化性質(zhì)研究.pdf

1、烏骨雞(Gallus gallus domesticus brisson)屬于鳥(niǎo)綱、雞形目、雉科、雞屬，是我國(guó)特有的藥用保健雞種，主要產(chǎn)于江西省泰和縣武山。作為傳統(tǒng)中藥，既可單獨(dú)食用又可配藥入復(fù)方，具有補(bǔ)肝腎、益氣血、退虛熱、治心腹痛等功效。烏骨雞最顯著的特征是它體內(nèi)含有大量黑色素?，F(xiàn)代藥理研究表明烏骨雞黑色素具有抗誘變、提高機(jī)體免疫力、延緩衰老、抑制病毒、消除自由基、抗氧化等功能。由此可見(jiàn)烏骨雞的藥理作用與其體內(nèi)的黑色素密切相關(guān)。目前

2、對(duì)烏骨雞的研究雖已取得了一定的成果，但對(duì)于烏骨雞黑色素還缺乏系統(tǒng)深入的研究，對(duì)其作用機(jī)理也不太明了，因此對(duì)黑色素的深入研究對(duì)于其作用機(jī)理及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)具有相當(dāng)大的現(xiàn)實(shí)意義。本文通過(guò)對(duì)烏骨雞黑色素的測(cè)定方法、溶解特性、光譜學(xué)特征、氨基酸殘留的研究，進(jìn)一步闡明烏骨雞黑色素的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特征以及沉積分布規(guī)律，以期為黑色素的有效提取利用和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，從而對(duì)大幅增加烏骨雞這一聞名全球的藥用資源的附加值，發(fā)掘我國(guó)的優(yōu)秀物種資源，具有較

3、高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義?，F(xiàn)將主要研究概括如下： 1、建立了烏骨雞黑色素含量的分光光度法定量測(cè)定方法。通過(guò)考察烏骨雞黑色素在不同溶劑中的溶解性，確定了其在0.1 mol/L NaOH溶液中溶解性較好，在此基礎(chǔ)上建立了烏骨雞黑色素含量的分光光度法測(cè)定方法。方法學(xué)考察表明該法精密度、穩(wěn)定性好，加標(biāo)回收率高。采用此方法對(duì)不同部位黑色素測(cè)定結(jié)果表明：烏骨雞不同部位黑色素含量差異較大，以骨膜中最高，達(dá)到3.749 mg/g，心臟中含量最低，

4、僅有0.138 mg/g。 2、建立了烏骨雞黑色素含量的高效液相定量測(cè)定方法。通過(guò)測(cè)定烏骨雞黑色素的氧化特征產(chǎn)物2，3-二羧酸吡咯(PDCA)和2，3，5-三羧酸吡咯(PTCA)，建立了高效液相法測(cè)定烏骨雞黑色素含量的方法。其色譜條件為：色譜柱為Kromasil C18(250mm×4.6 mm，5μm)；二極管陣列檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為282.8 nm(PDCA)和269.8 nm(PTCA)；流動(dòng)相為0.1％甲酸/甲醇梯度洗

5、脫；流速為0.6 mL/min。方法學(xué)考察表明該法精密度、穩(wěn)定性好，加標(biāo)回收率高。采用此方法對(duì)不同部位黑色素含量測(cè)定結(jié)果表明：骨膜>氣管>雞冠>雞爪>雞腸>腿肌>雞皮>雞肫>胸肌>雞心。用HPLC方法測(cè)得的結(jié)果與分光光度法的測(cè)定結(jié)果相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.978。 3、考察了烏骨雞不同部位黑色素的紫外-可見(jiàn)光譜和紅外光譜性質(zhì)，并對(duì)其進(jìn)行光譜學(xué)性質(zhì)差異研究。研究表明烏骨雞不同部位黑色素在紫外-可見(jiàn)光區(qū)都無(wú)明顯特征吸收峰，在200

6、～400nm呈現(xiàn)吸光值迅速增加的特征，與合成黑色素相比，在290～300 nm的吸收峰表明烏骨雞黑色素與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合。傅立葉紅外光譜分析顯示烏骨雞各部位黑色素的紅外光譜差異不大，其特征吸收峰主要集中在3600～3000 cm-1，2850～2950 cm-1，1610～1690 cm-1，1520～1540 cm-1，1380～1360 cm-1，1240～1200 cm-1六組峰上，其中以主要象征吲哚環(huán)的吸收峰最強(qiáng)，故初步推測(cè)烏骨雞

7、黑色素為一種具有真黑素特征的吲哚類物質(zhì)，同時(shí)紅外光譜顯示烏骨雞黑色素含有一定量的蛋白質(zhì)或氨基酸。 4、建立了2，4-二硝基氟苯柱前衍生測(cè)定烏骨雞黑色素中的氨基酸含量的方法。通過(guò)考察柱溫、衍生試劑用量、流動(dòng)相體系、流動(dòng)相pH值等因素對(duì)分離效果的影響，確定了氨基酸的最佳分離條件。其色譜分析條件為：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；二極管陣列檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流動(dòng)相為乙酸鈉緩沖鹽(pH=6.