α-Mangostin抑制黑色素瘤的功效研究及其機(jī)制初探.pdf

1、目的：研究α-Mangostin對黑色素瘤細(xì)胞的抗腫瘤功效及化療協(xié)同作用，并初步探討其可能的分子機(jī)制。
　　方法：（1）通過MTT法研究α-Mangostin對黑色素瘤細(xì)胞的抑制增殖作用；（2）采用透射電鏡觀察α-Mangostin對細(xì)胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，并用JC-1染色法檢測其對線粒體膜電位的影響；（3）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測α-Mangostin對黑色素瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)及周期阻滯作用；（4）利用Transwell小室檢測α-Ma

2、ngostin對黑色素瘤細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響；（5）通過MTT法檢測α-Mangostin與臨床常見化療藥物的協(xié)同作用；（6）通過Western Blot及Real time-PCR法檢測α-Mangostin抗黑色素瘤的分子機(jī)制；（7）構(gòu)建C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型，在體研究α-Mangostin對黑色素瘤的瘤體生長抑制作用及化療聯(lián)合增效作用，并在瘤體組織蛋白內(nèi)進(jìn)一步驗證分子機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）α-Mangosti

3、n可抑制黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375、B16F10、M14、SK-MEL-增殖；（2）α-Mangostin可引起黑色素瘤細(xì)胞線粒體腫脹、嵴結(jié)構(gòu)消失或不連續(xù)及空泡樣結(jié)構(gòu)。F540/F590比值與線粒體膜電位成負(fù)相關(guān)，而5、10μMα-Mangostin孵育24 h后F540/F590比值顯著增加，分別為對照組的1.63和3.00、4.38和20.25、3.73和6.9、8.67和20.6倍（p<0.05）；（3）20μMα-Mangostin

4、孵育24、48 h所誘導(dǎo)的凋亡分別為7.89％和70.1%、29.57%和85.92%、19.52%和86.49%、19.67%和47.1%（p<0.05）。α-Mangostin顯著增加黑色素瘤細(xì)胞G1期比例；（4）5、10μMα-Mangostin孵育后遷移至下室的細(xì)胞數(shù)比對照組顯著減少，分別減少至0.48和0.24、0.74和0.42、0.72和0.44、0.49和0.16倍（p<0.01）。5、10μMα-Mangostin孵育

5、后侵襲至下室的細(xì)胞數(shù)比對照組顯著減少，分別減少至0.35和0.32、0.37和0.24、0.62和0.31、0.47和0.16倍（p<0.01）；（5）α-Mangostin與順鉑、達(dá)卡巴嗪存在化療協(xié)同作用，與紫杉醇和長春新堿則未觀察到化療協(xié)同作用；（6）在黑色素瘤細(xì)胞中，α-Mangostin可下調(diào)RAS表達(dá)和PI3K的磷酸化水平，并可下調(diào)M14細(xì)胞的MITF表達(dá)水平，而其他三株細(xì)胞中未見MITF下調(diào)；（7）α-Mangostin組比

6、對照組瘤體體積減小，分別為955.10±103.10與336.00±35.95 mm3（p<0.001），α-Mangostin+順鉑組瘤體體積小于α-Mangostin組和順鉑組（分別為164.80±23.02、336.00±35.95和583.00±83.32 mm3，p<0.005），α-Mangostin與達(dá)卡巴嗪α-Mangostin組較對照組瘤體組織蛋白Ras表達(dá)和PI3K磷酸化水平下降。
　　結(jié)論：通過體內(nèi)外實(shí)驗，我