新型雌激素受體ERa36高表達(dá)在MCF10A細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用.pdf

1、乳腺癌是一種雌激素依賴(lài)性疾病,雌激素(Estrogen)通過(guò)與雌激素受體(EstrogenReceptor.ER)結(jié)合激活其信號(hào)通路,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。雌激素的作用模式主要包括核啟動(dòng)的雌激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(NISS)和膜啟動(dòng)的雌激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(MISS)。
　　 Caveolin-1(Cav-1)在乳腺癌的發(fā)展中作為抑癌因子而備受關(guān)注。本室前期工作表明,人乳腺上皮細(xì)胞系MCF10A中沒(méi)有ERα36的表達(dá),當(dāng)Cav-1表達(dá)降低時(shí),ER

2、α36表達(dá)明顯增加。這一發(fā)現(xiàn)不但使得克隆ERα36成為了可能,也為進(jìn)一步研究ERα36的功能提供了很好的細(xì)胞模型。本文利用siRNA技術(shù)建立Cav-1低表達(dá)而ERα36高表達(dá)的穩(wěn)定傳代細(xì)胞模型MCF10ACE,采用基因芯片技術(shù)檢測(cè)ERa36高表達(dá)時(shí)雌激素信號(hào)通路基因表達(dá)譜,進(jìn)而研究ERα36在雌激素激活的P13K/AKT信號(hào)通路中的作用及其與乳腺細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)系,旨在探討Cav-1與ERa36相互作用調(diào)節(jié)膜起始的雌激素信號(hào)通路控制乳腺上皮

3、細(xì)胞轉(zhuǎn)化機(jī)制。
　　 結(jié)果:1)利用siRNA技術(shù)建立了Cav-1低表達(dá)而ERa36高表達(dá)的穩(wěn)定傳代細(xì)胞模型MCFl0AcE,Cav-1表達(dá)降低時(shí)可以以雌激素依賴(lài)性方式促進(jìn)ERa36表達(dá)增加；2)利用MCF10ACE模型進(jìn)行癌變相關(guān)基因和雌激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的DNA微陣列(DNA super microarry)分析,發(fā)現(xiàn)當(dāng)Cav-1基因下調(diào)時(shí),雌激素相關(guān)信號(hào)通路的125個(gè)基因中10個(gè)基因明顯下調(diào),6個(gè)基因明顯上調(diào)；3)利用蛋

4、白質(zhì)免疫共沉淀和免疫印跡雜交技術(shù)研究Cav-1與ERa之間的相互作用及ERa介導(dǎo)的MAPK/ERK和P13K/AKT通路激活,發(fā)現(xiàn)Cav-1與ERa存在相互作用關(guān)系,Cav-1表達(dá)下調(diào)不但可以影響二者之間的相互作用能力,還可以激活ERa36的表達(dá)以及ERa36介導(dǎo)的Ca2+信號(hào)通路、MAPK/ERK和P13K/AKT通路的異?；罨?；4)利用ERa阻斷劑和P13K/AKT抑制劑處理MCF10ACE細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)雌激素可以激活不同ERa亞型介導(dǎo)

5、的P13K/AKT通路和MEK/ERK信號(hào)通路,促進(jìn)乳腺細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化,但只有在Cav-1表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞中ERa36表達(dá)最高,Cav-1表達(dá)減少使乳腺細(xì)胞對(duì)抑制劑的敏感性增加,這種作用是通過(guò)ERa與Cav-1的相互作用實(shí)現(xiàn)的。此外,P13K/AKT抑制劑能明顯抑制MCF10ACE細(xì)胞MAPK/ERK通路的激活。
　　 結(jié)論:Cav-1可能是調(diào)節(jié)膜起始的雌激素信號(hào)通路的一個(gè)潛在靶點(diǎn),Cav-1低表達(dá)以雌激素依賴(lài)性方式促進(jìn)ERa36