無菌豚鼠的培育及無菌豚鼠EV71比較醫(yī)學(xué)研究.pdf

1、豚鼠是一種應(yīng)用廣泛的實驗動物?？梢杂糜诿庖邔W(xué)、傳染病、藥物學(xué)、兒科學(xué)等方面的研究。無菌豚鼠在生物醫(yī)學(xué)實驗中因為排除了病原體和環(huán)境因素的影響，受抗原刺激時，免疫反應(yīng)強烈且單一，因此在生命科學(xué)研究中有著廣闊的應(yīng)用前景。1932年Reyniers獲得無菌豚鼠。我所自1980年開始研究無菌豚鼠并培育成功，為我國無菌豚鼠的發(fā)展和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。但限于當(dāng)時的生物醫(yī)學(xué)發(fā)展水平，國內(nèi)對無菌豚鼠的需求較少，而沒能進(jìn)行規(guī)范化培育與推廣、應(yīng)用。隨著生命科學(xué)的

2、發(fā)展和生物醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，重大疾病特別是重大傳染病研究的深入，無菌豚鼠將逐漸顯示出其重要價值。
　　 EV71是一種含有正向RNA單鏈無包膜病毒，屬于腸道病毒屬，小核糖核酸病毒科。EV71和CA10、CA16等共屬于A性腸道病毒，容易引起手足口病。但是EV71的感染有時會產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如無菌性腦炎、腦干腦炎、和脊椎灰質(zhì)炎相似的麻痹。自1974年首次報道以來，EV71已在世界范圍內(nèi)引起十多次爆發(fā)與流行。例如澳大利亞、歐洲、亞

3、洲和美國。近年來在亞太地區(qū)有上升的趨勢。雖然HFMD的流行性很強，但是對其致病機(jī)理以及感染后比較醫(yī)學(xué)方面的研究很少。其主要原因之一是EV71很難感染動物，制作成穩(wěn)定的動物模型。并且國內(nèi)外建立成功的動物模型多為出生七日以內(nèi)的乳鼠，難以采集血液、器官材料進(jìn)行比較醫(yī)學(xué)方面的研究。
　　 基于以上理由，本論文開展了無菌豚鼠制作技術(shù)的規(guī)范化和無菌豚鼠EV71比較醫(yī)學(xué)的研究。
　　 無菌豚鼠制作技術(shù)的規(guī)范化實驗采取子宮摘除術(shù)的方法對

4、普通級豚鼠進(jìn)行剖腹凈化，在無菌隔離器內(nèi)剝離子宮取仔，用人工哺乳的方法將仔豚鼠培育成無菌豚鼠，并每隔一段時期進(jìn)行無菌檢測。以保證無菌豚鼠的質(zhì)量。同時對孕豚鼠、豚鼠子宮摘除手術(shù)日期、豚鼠人工乳、人工飼料等進(jìn)行對比選擇。40日左右時，分別對動物心臟取血，自動生化分析儀測定無菌豚鼠、普通級豚鼠血液學(xué)參數(shù)。比較三組動物血常規(guī)、血生化有無差異。為無菌豚鼠的應(yīng)用和推廣奠下基礎(chǔ)。
　　 無菌豚鼠EV71比較醫(yī)學(xué)研究實驗利用第一部分得到的無菌豚鼠

5、作為模型動物，利用多種接種方法接種病毒。分別進(jìn)行臨床觀察、病原學(xué)檢查，用來驗證動物感染動物模型成立。同時對不同組感染后動物模型的一些免疫指標(biāo)如：EV71特異性抗體，動物基礎(chǔ)性IgG、IgA、IL-2、IL-6水平及CD4/CD8變化進(jìn)行比較分析。感染了EV71的無菌豚鼠出現(xiàn)皰疹、腹瀉等臨床癥狀，普通豚鼠無明顯的臨床癥狀。病原學(xué)檢測無菌豚鼠100％感染病毒，在多個組織中可檢測到病毒；普通豚鼠病毒檢出率低并無明顯的規(guī)律性。免疫學(xué)檢測中，首次

6、發(fā)現(xiàn)無菌豚鼠在EV71感染后血清中無特異性抗體產(chǎn)生，但是基礎(chǔ)抗體值增加；普通豚鼠血清中檢測出特異性抗體，且基礎(chǔ)抗體值增高程度較無菌豚鼠高，具體原因不明。CD4/CD8比值升高，且CD4、CD8細(xì)胞數(shù)均有不同程度的降低。皰疹出現(xiàn)處的組織有明顯的水腫現(xiàn)象，無炎性因子浸潤。結(jié)果表明無菌豚鼠更易感染EV71病毒。無菌豚鼠和普通豚鼠在感染病毒后免疫指標(biāo)檢測結(jié)果差異大，需要進(jìn)一步的探討其原因。本文首次嘗試使用無菌豚鼠作為EV71感染動物模型，為以后