應(yīng)激大鼠條件性位置偏愛及伏隔核多巴胺機(jī)制的皮質(zhì)酮調(diào)節(jié)通路研究.pdf

1、第一章急、慢性外周注射皮質(zhì)酮和足底電擊暴露對(duì)大鼠嗎啡位置偏愛的影響 目的:通過測評(píng)急性應(yīng)激和慢性應(yīng)激對(duì)大鼠嗎啡位置偏愛(CPP)的影響，以及皮質(zhì)酮急性和慢性暴露對(duì)大鼠嗎啡位置偏愛的影響，為嗎啡依賴在不同應(yīng)激條件下的形成作初步探索，并探討糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激和物質(zhì)成癮中的作用。 方法:78只雄性SD大鼠隨機(jī)分為電擊+嗎啡組、皮質(zhì)酮+嗎啡組、皮質(zhì)酮組、對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組每組8只，對(duì)照組每組6只。電擊+嗎啡組：足底電擊1次／天，急性電

2、擊僅電擊1天，慢性電擊連續(xù)7天，電擊后30分鐘開始腹腔注射嗎啡(3mg／kg／次／天)，連續(xù)4天。皮質(zhì)酮+嗎啡組：皮質(zhì)酮?jiǎng)┝繛? mg／kg／次／天，急性皮質(zhì)酮暴露僅注射1天，慢性皮質(zhì)酮暴露連續(xù)注射17天，注射皮質(zhì)酮后30分鐘開始注射嗎啡，嗎啡注射方式、劑量和時(shí)間同電擊+嗎啡組。皮質(zhì)酮組：皮質(zhì)酮?jiǎng)┝繛? mg／kg／次／天，急性皮質(zhì)酮暴露僅注射1天，慢性皮質(zhì)酮暴露連續(xù)注射7天。按照同期對(duì)照的原則，設(shè)不電擊+嗎啡組、生理鹽水+嗎啡組、生理

3、鹽水組。將實(shí)驗(yàn)前測定的大鼠自然非偏愛側(cè)作為伴藥側(cè)。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于處理因素施加前和末次注射藥物后2小時(shí)測評(píng)大鼠15分鐘內(nèi)在伴藥側(cè)的停留時(shí)間(秒)。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSSll.5進(jìn)行單因素方差分析及多重兩兩比較。 結(jié)論:①表明該方式可靠地建立了應(yīng)激/皮質(zhì)酮-嗎啡依賴動(dòng)物模型。②慢性電擊和慢性皮質(zhì)酮均增強(qiáng)大鼠嗎啡CPP,兩者作用無顯著性差異,提示反復(fù)外周注射皮質(zhì)酮能模擬慢性足底電擊對(duì)大鼠嗎啡CPP的作用,應(yīng)激引起嗎啡犒賞作用增強(qiáng)與糖皮

4、質(zhì)激素分泌密切相關(guān)。③慢性皮質(zhì)酮注射后大鼠可以形成位置偏愛,而急性皮質(zhì)酮沒有這種作用,提示只有反復(fù)給予皮質(zhì)酮才具有犒賞作用。 第二章慢性不同濃度皮質(zhì)酮處理對(duì)大鼠伏隔核多巴胺、多巴胺受體、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體及位置偏愛的影響 目的:通過給大鼠注射不同濃度皮質(zhì)酮(CORT),研究對(duì)伏隔核(NAc)多巴胺(DA)、多巴胺受體(DAR)、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)及位置偏愛的影響,探討皮質(zhì)酮對(duì)中腦多巴胺傳遞的作用。 方法:66只雄

5、性SD大鼠隨機(jī)分為高、中、低濃度皮質(zhì)酮組和對(duì)照組。高濃度皮質(zhì)酮組:CORT劑量為5mg/kg/次/d;中濃度皮質(zhì)酮組:CORT劑量為3 mg/kg/次/d;低濃度皮質(zhì)酮組∶CORT劑量為1mg/kg/次/d;均連續(xù)注射7天。按照同期對(duì)照的原則,設(shè)生理鹽水對(duì)照組。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于處理因素施加前和末次注射藥物后2小時(shí)測評(píng)大鼠15分鐘內(nèi)在伴藥側(cè)的停留時(shí)間(秒)。每組大鼠隨機(jī)選擇一半立即斷頭取腦準(zhǔn)備檢測NAcDA,另一半大鼠留做免疫組化和原位雜

6、交檢測、DAT、DlR/D2RmRNA。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5進(jìn)行單因素方差分析、多重兩兩比較及相關(guān)分析。 結(jié)論:①CORT本身具有犒賞作用,注射CORT后大鼠在伴藥側(cè)停留時(shí)間明顯延長,反復(fù)給予中濃度CORT(3mg/kg)最易獲得犒賞作用。②注射CORT使NAcDA水平均明顯升高,且DA的釋放是CORT濃度依賴性的,CORT的犒賞作用和DA能系統(tǒng)激活之間存在密切聯(lián)系。③CORT劑量增加,D2R下調(diào),DAT減少,NAcD

7、A水平升高,突觸間隙DA停留時(shí)間延長,增加了動(dòng)物CORT條件性位置偏愛的獲得和保持。DIR無顯著改變,D1和D2受體作用是分離的,可能通過各自不同的受體后途徑參與CORT強(qiáng)化效應(yīng)的調(diào)節(jié)過程。 第三章皮質(zhì)酮受體拮抗劑和多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體拮抗劑對(duì)大鼠伏隔核多巴胺水平及位置偏愛的影響 目的:通過給大鼠注射糖皮質(zhì)激素受體(GR)拮抗劑RU38486和鹽皮質(zhì)激素受體(MR)拮抗劑螺內(nèi)酯,探討究竟是哪種受體介導(dǎo)了CORT的作用;給予大

8、鼠DAT拮抗劑GBR12935,探討DAT在CORT促進(jìn)物質(zhì)依賴中的作用。對(duì)給予CORT后多個(gè)連續(xù)時(shí)間點(diǎn)伏隔核DA水平的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行系統(tǒng)研究。 方法:48只雄性sD大鼠隨機(jī)分為拮抗劑組和對(duì)照組,另59只作為動(dòng)態(tài)檢測組。GBR12935+CORT(GBR+CORT組):腹腔注射GBRl2935(0.015mol/kg),30min后給予CORT(5mg/kg/次/d和1 mg/kg/次/d)。米非司酮+CORT組(RU+CORT

9、組):腹腔注射米非司酮(20mg/kg)，30min后給予CORT(5mg／kg／次／d)。螺內(nèi)酯+CORT細(xì)(SPIR+CORT組)：腹腔注射螺內(nèi)酯(20mg／kg)，30min后給予CORT(5mg／kg／次／d)。按照同期對(duì)照的原則，設(shè)CORT對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組。動(dòng)態(tài)檢測組：分別于腹腔注射CORT(5mg／kg／次／d)后的dO，dl，d3，d5，d7，d9，dl l，d13，d15檢測NAcDA水平的變化。所有拮抗劑組和對(duì)照

10、組動(dòng)物均在處理因素施加前和末次注射藥物后2小時(shí)測評(píng)大鼠15分鐘內(nèi)在伴藥側(cè)的停留時(shí)間(秒)，然后立即斷頭取腦檢NNAcDA；動(dòng)態(tài)檢測組在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦檢測NAcDA。統(tǒng)計(jì)采用sPss11.5進(jìn)行單因素方差分析及多重兩兩比較。 結(jié)論: ①預(yù)先給予DAT拮抗~IJGBRl2935后，DA水平不再隨看CORT濃度的變化而變化；結(jié)合第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，CORT可以促進(jìn)NAcDA水平升高，使NAcAT下降；有力證明是DAT介導(dǎo)了cORT