應激大鼠條件性位置偏愛及伏隔核多巴胺機制的皮質酮調節(jié)通路研究.pdf

1、第一章急、慢性外周注射皮質酮和足底電擊暴露對大鼠嗎啡位置偏愛的影響 目的:通過測評急性應激和慢性應激對大鼠嗎啡位置偏愛(CPP)的影響，以及皮質酮急性和慢性暴露對大鼠嗎啡位置偏愛的影響，為嗎啡依賴在不同應激條件下的形成作初步探索，并探討糖皮質激素在應激和物質成癮中的作用。 方法:78只雄性SD大鼠隨機分為電擊+嗎啡組、皮質酮+嗎啡組、皮質酮組、對照組。實驗組每組8只，對照組每組6只。電擊+嗎啡組：足底電擊1次／天，急性電

2、擊僅電擊1天，慢性電擊連續(xù)7天，電擊后30分鐘開始腹腔注射嗎啡(3mg／kg／次／天)，連續(xù)4天。皮質酮+嗎啡組：皮質酮劑量為5 mg／kg／次／天，急性皮質酮暴露僅注射1天，慢性皮質酮暴露連續(xù)注射17天，注射皮質酮后30分鐘開始注射嗎啡，嗎啡注射方式、劑量和時間同電擊+嗎啡組。皮質酮組：皮質酮劑量為5 mg／kg／次／天，急性皮質酮暴露僅注射1天，慢性皮質酮暴露連續(xù)注射7天。按照同期對照的原則，設不電擊+嗎啡組、生理鹽水+嗎啡組、生理

3、鹽水組。將實驗前測定的大鼠自然非偏愛側作為伴藥側。所有實驗動物均于處理因素施加前和末次注射藥物后2小時測評大鼠15分鐘內在伴藥側的停留時間(秒)。統(tǒng)計分析采用SPSSll.5進行單因素方差分析及多重兩兩比較。 結論:①表明該方式可靠地建立了應激/皮質酮-嗎啡依賴動物模型。②慢性電擊和慢性皮質酮均增強大鼠嗎啡CPP,兩者作用無顯著性差異,提示反復外周注射皮質酮能模擬慢性足底電擊對大鼠嗎啡CPP的作用,應激引起嗎啡犒賞作用增強與糖皮

4、質激素分泌密切相關。③慢性皮質酮注射后大鼠可以形成位置偏愛,而急性皮質酮沒有這種作用,提示只有反復給予皮質酮才具有犒賞作用。 第二章慢性不同濃度皮質酮處理對大鼠伏隔核多巴胺、多巴胺受體、多巴胺轉運體及位置偏愛的影響 目的:通過給大鼠注射不同濃度皮質酮(CORT),研究對伏隔核(NAc)多巴胺(DA)、多巴胺受體(DAR)、多巴胺轉運體(DAT)及位置偏愛的影響,探討皮質酮對中腦多巴胺傳遞的作用。 方法:66只雄

5、性SD大鼠隨機分為高、中、低濃度皮質酮組和對照組。高濃度皮質酮組:CORT劑量為5mg/kg/次/d;中濃度皮質酮組:CORT劑量為3 mg/kg/次/d;低濃度皮質酮組∶CORT劑量為1mg/kg/次/d;均連續(xù)注射7天。按照同期對照的原則,設生理鹽水對照組。所有實驗動物均于處理因素施加前和末次注射藥物后2小時測評大鼠15分鐘內在伴藥側的停留時間(秒)。每組大鼠隨機選擇一半立即斷頭取腦準備檢測NAcDA,另一半大鼠留做免疫組化和原位雜

6、交檢測、DAT、DlR/D2RmRNA。統(tǒng)計分析采用SPSS11.5進行單因素方差分析、多重兩兩比較及相關分析。 結論:①CORT本身具有犒賞作用,注射CORT后大鼠在伴藥側停留時間明顯延長,反復給予中濃度CORT(3mg/kg)最易獲得犒賞作用。②注射CORT使NAcDA水平均明顯升高,且DA的釋放是CORT濃度依賴性的,CORT的犒賞作用和DA能系統(tǒng)激活之間存在密切聯(lián)系。③CORT劑量增加,D2R下調,DAT減少,NAcD

7、A水平升高,突觸間隙DA停留時間延長,增加了動物CORT條件性位置偏愛的獲得和保持。DIR無顯著改變,D1和D2受體作用是分離的,可能通過各自不同的受體后途徑參與CORT強化效應的調節(jié)過程。 第三章皮質酮受體拮抗劑和多巴胺轉運體拮抗劑對大鼠伏隔核多巴胺水平及位置偏愛的影響 目的:通過給大鼠注射糖皮質激素受體(GR)拮抗劑RU38486和鹽皮質激素受體(MR)拮抗劑螺內酯,探討究竟是哪種受體介導了CORT的作用;給予大

8、鼠DAT拮抗劑GBR12935,探討DAT在CORT促進物質依賴中的作用。對給予CORT后多個連續(xù)時間點伏隔核DA水平的動態(tài)變化進行系統(tǒng)研究。 方法:48只雄性sD大鼠隨機分為拮抗劑組和對照組,另59只作為動態(tài)檢測組。GBR12935+CORT(GBR+CORT組):腹腔注射GBRl2935(0.015mol/kg),30min后給予CORT(5mg/kg/次/d和1 mg/kg/次/d)。米非司酮+CORT組(RU+CORT

9、組):腹腔注射米非司酮(20mg/kg)，30min后給予CORT(5mg／kg／次／d)。螺內酯+CORT細(SPIR+CORT組)：腹腔注射螺內酯(20mg／kg)，30min后給予CORT(5mg／kg／次／d)。按照同期對照的原則，設CORT對照組、生理鹽水對照組。動態(tài)檢測組：分別于腹腔注射CORT(5mg／kg／次／d)后的dO，dl，d3，d5，d7，d9，dl l，d13，d15檢測NAcDA水平的變化。所有拮抗劑組和對照

10、組動物均在處理因素施加前和末次注射藥物后2小時測評大鼠15分鐘內在伴藥側的停留時間(秒)，然后立即斷頭取腦檢NNAcDA；動態(tài)檢測組在規(guī)定時間點斷頭取腦檢測NAcDA。統(tǒng)計采用sPss11.5進行單因素方差分析及多重兩兩比較。 結論: ①預先給予DAT拮抗~IJGBRl2935后，DA水平不再隨看CORT濃度的變化而變化；結合第二部分實驗結果，CORT可以促進NAcDA水平升高，使NAcAT下降；有力證明是DAT介導了cORT