失血性休克血清對NF-κB活化、TM和EPCR表達(dá)的影響及PDTC的干預(yù)作用.pdf

1、目的:
　　 1.探討失血性休克血清在體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞時對核因子-κB(NF-κB)活化表達(dá)的影響同培養(yǎng)時間的關(guān)系。
　　 2.通過二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的干預(yù)作用，初步探討失血性休克血清對內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)和內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(EPCR)的影響及可能的作用途徑。
　　 方法:
　　 1.將60只成年健康的Sprague Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為正常對照組、假休克組

2、、失血性休克組。采用放血法制備失血性休克大鼠模型。失血性休克組大鼠15 min內(nèi)放血使平均動脈壓降至40mmHg，穩(wěn)定60分鐘后于休克后3h下腔靜脈取血。
　　 2.留取正常對照組、假休克組、失血性休克組血清，無菌處理后加入到培養(yǎng)基，與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)培養(yǎng)，分為正常對照組、假休克組、失血性休克組及PDTC干預(yù)(PDTC+失血性休克血清)組。分別培養(yǎng)3、6、12、24小時。通過Western blotting技術(shù)檢

3、測各組血清培養(yǎng)后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)P65蛋白的表達(dá)，檢測培養(yǎng)12小時組的TM、EPCR及核內(nèi)P65蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞培養(yǎng)3小時，與正常對照組及假休克組比較，休克組的核內(nèi)P65蛋白含量上升，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并持續(xù)升高至12h，但24h組較12h時有所降低。與正常對照組及假休克組相比，休克組血清刺激HUVECs6小時和12小時后，細(xì)胞核內(nèi)P65蛋白升高，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;培養(yǎng)24小時后，雖然較

4、6h和12h有所降低，但與正常對照組及假休克組相比，細(xì)胞核內(nèi)的P65蛋白仍處于升高狀態(tài)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.休克血清刺激12小時后，與正常對照組及假休克組相比，休克組的細(xì)胞核內(nèi)P65蛋白升高，同時TM蛋白和EPCR蛋白含量下降。與休克組比較，PDTC干預(yù)組的細(xì)胞核內(nèi)P65蛋白降低，而TM及EPCR蛋白含量增高。與正常對照組相比，假休克組及PDTC干預(yù)組的P65、TM和EPCR蛋白含量均無明顯差異。
　　 結(jié)論:

5、r>　　 1.失血性休克血清培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞3h后即可使NF-κ Bp65蛋白發(fā)生核移位，且在12h到達(dá)高峰。PDTC能有效的抑制休克血清作用后核內(nèi)p65蛋白的降低。
　　 2.失血性休克血清下調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TM、EPCR蛋白的表達(dá)，提示失血性休克血清對內(nèi)皮細(xì)胞有損傷作用;PDTC可以有效抑制這一現(xiàn)象。
　　 3.PDTC可以通過抑制NF-κB的活化，來影響TM、EPCR蛋白的表達(dá)，也就是說，可以通過調(diào)節(jié)NF-