獲得性純紅再障患者γδT細(xì)胞亞群和功能的研究.pdf

1、該文利用流式細(xì)胞儀分析了患者外周血的γδT細(xì)胞亞群,對比分析其治療前后的變化.并且用免疫磁珠分選γδT細(xì)胞,通過細(xì)胞培養(yǎng)方法了解純紅再障的發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞免疫機制.材料和方法四川大學(xué)華西醫(yī)院血液科2003年9月至2004年4月確診的11例純紅再障患者(N=11)依次進入研究.使用免疫抑制劑CsA治療后患者分為有效組(治療后血紅蛋白值恢復(fù)正常,或較治療前升高30g/L以上)和無效組.23例健康成人作為正常對照.采集患者靜脈血1ml,分為兩份

2、,分別加入兩組組合抗體:①Cy5標(biāo)記的抗人CD3單抗/FITC標(biāo)記的抗人CD4單抗/PE標(biāo)記的抗人TCRγδ單抗,以及②Cy5標(biāo)記的抗人CD3單抗/FITC標(biāo)記的抗人CD8單抗/PE標(biāo)記的抗人TCR γδ單抗,作流式細(xì)胞術(shù)檢測.無菌采集患者靜脈血5ml,肝素鈉抗凝,淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離外周單個核細(xì)胞,加入含有RPMI1640,胎牛血清(FCS),植物血凝素(PHA),重組白細(xì)胞介素-2(rIL-2)的培養(yǎng)體系,置37□,飽

3、和濕度5﹪CO<,2>孵箱培養(yǎng)兩周后,通過與TCRγδ單克隆抗體連接的免疫磁珠分離出γδT細(xì)胞.無菌采集正常人骨髓5ml,肝素鈉抗凝,淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離外周單個核細(xì)胞,將γδT細(xì)胞按不同的濃度梯度加入正常骨髓BFU-E/CFU-E,和CFU-GM集落培養(yǎng)體系,置37口,飽和濕度5﹪CO<,2>孵箱培養(yǎng),7天后觀察CFU-E,CFU-GM生長情況,14天后觀察BFU-E生長,并采用兩人盲法計數(shù)分別計數(shù)紅系和粒系集落.結(jié)論