PAP-M6P對(duì)活化肝星狀細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：肝纖維化是各種慢性肝損傷的共同結(jié)果，肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）的活化是肝纖維化形成的病理生理基礎(chǔ)，而活化期HSC膜表面的6-磷酸甘露糖/胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ型受體（6-phospho- mannopyranoside/insulin like growth factor Ⅱ receptor，M6P/IGFⅡR）顯著增加。本研究通過化學(xué)合成6-磷酸-α-D-對(duì)氨基苯基甘露糖苷（p-aminoph

2、enyl 6-phospho-alpha-D--mannopyranoside，PAP-M6P），以期探討PAP-M6P對(duì)活化HSC增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）分泌水平的影響。 方法：①化學(xué)合成帶有6-磷酸甘露糖（mannose-6-phosphate，M6P）基團(tuán)、而不影響原有活性功能基團(tuán)的靶向分子PAP-M6P，并經(jīng)核磁共振譜鑒定分子結(jié)構(gòu)及純度。②接種培養(yǎng)活化表型的HSC-T

3、6細(xì)胞株，分別以終濃度為300、400、500、600μg/ml的PAP-M6P共孵育24h、48h、72h，采用細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)試劑CCK-8檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)藥物對(duì)HSC-T6細(xì)胞周期的影響。③酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定培養(yǎng)上清液中Ⅲ型前膠原（procollagen Ⅲ，PCⅢ）、Ⅳ型膠原（co

4、llagenⅣ，CⅣ）、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)的水平。 結(jié)果：①人工合成的PAP-M6P純度在95％以上，達(dá)到合成要求。②各PAP-M6P處理組的藥物濃度對(duì)HSC-T6的增殖均有明顯的抑制作用（P＜0.05），且隨著濃度的上升抑制率逐漸升高，并呈明顯的時(shí)間依賴性。③各PAP-M6P處理組中G0/G1期細(xì)胞的比例隨著PAP-M6P劑量增大而逐漸升高，S期比例則逐漸降低，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.0