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1、目的: 體外誘導(dǎo)分化內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs),探討其生物學(xué)特性,觀察EPCs移植對(duì)慢性深靜脈血栓的治療作用,為慢性深靜脈血栓的治療提供一種新的思路。 方法: 1.密度梯度離心法獲取Wistar大鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone marrow-derived mononuclear cells,BMMNCs),內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)基(EGM-2MV)體外誘導(dǎo)分化為EPC
2、s并進(jìn)行鑒定。MTT比色法觀察其增殖能力。 2.采用結(jié)扎腎下段下腔靜脈結(jié)合注射凝血酶的方法建立大鼠深靜脈血栓模型,并飼養(yǎng)10 d以上。動(dòng)物隨機(jī)分三組,經(jīng)大鼠股靜脈穿刺注射移植液體。A組(n=25):EPCs移植組,移植1ml含有106個(gè)EPCs的細(xì)胞懸液;B組(n=25):EGM-2MV對(duì)照組,移植1ml培養(yǎng)基;C組(n=25):空白對(duì)照組,建立血栓模型后不做其他處理。 3.移植后分時(shí)間段取出血栓段下腔靜脈及血栓,應(yīng)用免
3、疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組血栓中新生血管及機(jī)化再通的情況。Western blot測(cè)定第14天各組血栓內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的蛋白表達(dá)變化。 4.采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果: 體外成功誘導(dǎo)培養(yǎng)了大鼠骨髓源性EPCs,下腔靜脈造影顯示成功構(gòu)建了大鼠慢性深靜脈血栓模型;vWF免疫組化顯示A組的血栓再通毛細(xì)血管密度明顯高于B、C組,B、C組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Wes
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