INA細(xì)菌種類鑒定及其與雜柑‘不知火’果實(shí)霜凍關(guān)系的研究.pdf

1、本研究在綜合調(diào)查四川雜柑栽培生產(chǎn)情況下，以雜柑受凍果實(shí)為材料，分離INA細(xì)菌，鑒定四川雜柑上INA細(xì)菌種類，測定其冰核活性，并探討影響INA細(xì)菌冰核活性的因素：然后將分離的INA細(xì)菌回接到雜柑‘不知火’正常果實(shí)上，人工模擬自然霜夜降溫過程處理果實(shí)，觀察果實(shí)受凍程度，測定并分析其相對(duì)電導(dǎo)率(REC)、丙二醛(MDA)含量變化以及超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)活性變化規(guī)律，從而探討INA細(xì)菌與果實(shí)霜凍害

2、的關(guān)系，揭示INA細(xì)菌誘發(fā)‘不知火’果實(shí)霜凍害的機(jī)理，結(jié)果表明： 1、所采集的20份受凍雜柑果實(shí)經(jīng)分離得到31個(gè)菌株，冰核活性測定結(jié)果顯示：有16個(gè)菌株有冰核活性，首次在雜柑上證實(shí)有INA細(xì)菌的存在。冰核活性菌株除3號(hào)凍滴率為80％，其余達(dá)到85％～95％。且假單胞菌的平均凍滴率為91.25％，高于歐文氏菌85％的平均凍滴率。 2、細(xì)菌學(xué)鑒定得出：分離自雜柑受凍果實(shí)上的這16個(gè)菌株屬于2個(gè)屬3個(gè)種：鳳梨歐文氏菌(E.an

3、anas)，6株，占37.5％；丁香假單胞菌未定變種(P.syringaepvs.)，6株，占37.5％；菜豆莢斑病菌(P.viridiflava)，4株，占25％。且E.ananas的冰核活性小于P.syringaepvs.和P.viridiflava。這是雜柑上關(guān)于INA細(xì)菌的首次報(bào)道。 3、將分離到的INA細(xì)菌回接到正常‘不知火’果實(shí)上，人工模擬自然霜夜降溫過程，果皮相對(duì)電導(dǎo)率的變化結(jié)果表明：P.syringaepvs.＞

4、P.viridiflava＞E.ananas＞CK，并隨低溫強(qiáng)度提高而增大。顯著性分析得出：接種INA細(xì)菌的果皮相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于CK，說明在相同低溫脅迫下，INA細(xì)菌的確能夠使雜柑‘不知火’果實(shí)凍害加重，并使受凍溫度提高1℃～2℃。且不同種類的NIA細(xì)菌對(duì)果實(shí)凍害的加重程度是不同，這與它們自身冰核活性的強(qiáng)弱成正相關(guān)。這些都證明了INA細(xì)菌可以誘發(fā)和加重‘不知火’果實(shí)的霜凍害。 4、果皮MDA含量變化情況表明：接種INA細(xì)菌的果

5、皮MDA含量均高于對(duì)照，只是不同INA細(xì)菌處理，上升趨勢(shì)有所不同，且MDA含量大小關(guān)系為：P.syringaepvs.＞P.viridiflava＞E.ananas＞CK。說明低溫脅迫下INA細(xì)菌能明顯促進(jìn)膜脂過氧化作用，降低‘不知火’果實(shí)的抗寒性，經(jīng)顯著性分析得：在0℃下，接種INA細(xì)菌的果皮MDA含量與對(duì)照相比差異不顯著，隨著溫度的降低，差異逐漸明顯，在-3℃下達(dá)到極顯著水平，說明與對(duì)照相比，INA細(xì)菌的確加重了‘不知火’果實(shí)的受凍

6、程度，且三種INA細(xì)菌的冰核活性存在差異。 5、由保護(hù)酶活性變化結(jié)果可知：果皮和果肉中，對(duì)照和各處理下SOD活性變化趨勢(shì)基本相同，并且果皮SOD活性始終遠(yuǎn)高于果肉SOD活性，在整個(gè)低溫處理過程中對(duì)照SOD活性始終高于各處理，隨著溫度的降低這種差異更加明顯，經(jīng)顯著性分析：3種INA細(xì)菌和對(duì)照之間差異均達(dá)到極顯著水平，與對(duì)照相比，接種INA細(xì)菌使細(xì)胞膜的傷害溫度提高了2℃。所以，INA細(xì)菌能夠使‘不知火’果實(shí)SOD活性降低，從而降低

7、它對(duì)細(xì)胞膜的保護(hù)作用。 POD活性隨低溫脅迫的加劇而升高。在整個(gè)降溫過程中，對(duì)照的POD活性始終高于各處理，這種趨勢(shì)隨溫度的降低更加明顯。顯著性分析可知：在0℃時(shí)，對(duì)照與各處理間POD活性差異不顯著，隨著溫度的降低，接種INA細(xì)菌的果皮POD活性顯著低于對(duì)照，且P.syringaepvs.處理下的果皮酶活性顯著低于P.viridiflava處理下的酶活性，說明接種INA細(xì)菌可以降低POD活性，使H2O2積累，加劇低溫對(duì)細(xì)胞膜的破

8、壞。 對(duì)照和各處理CAT活性均隨溫度下降而下降，但對(duì)照始終高于各處理，且不同處理之間變化趨勢(shì)有所不同，而且果皮CAT活性明顯高于果肉CAT活性。可見，INA細(xì)菌能降低CAT活性，使其不能有效清除自由基，加劇膜脂過氧化速度。 6、影響INA細(xì)菌冰核活性的因素實(shí)驗(yàn)得知：20℃培養(yǎng)的INA細(xì)菌生長最好，其凍滴率最高，說明他們活性高，隨著溫度的升高或降低都會(huì)影響INA細(xì)菌的生長和冰核活性；在同一菌液濃度下，隨著處理溫度的降低，I