正常骨髓液與血管內(nèi)膜損傷后骨髓液促血管新生的觀察.pdf

1、[目的】骨髓干細(xì)胞移植已在臨床廣泛開展，并取得了令人鼓舞的效果，然而心臟干細(xì)胞移植中干細(xì)胞能否轉(zhuǎn)化為心肌細(xì)胞仍存在許多爭議。一些學(xué)者認(rèn)為移植骨髓干細(xì)胞能夠分泌促血管新生的活性因子，通過這些因子促進(jìn)心肌血管新生，進(jìn)而達(dá)到心功能改善的效果。骨髓液中是否含有較高濃度的促進(jìn)血管新生的細(xì)胞因子目前尚無研究報(bào)道。 血管內(nèi)膜損傷后，機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)使血清中多種細(xì)胞因子濃度明顯增高，這些細(xì)胞因子對(duì)骨髓干細(xì)胞具有動(dòng)員作用。這一作用是否改變骨髓液中促

2、血管生長因子濃度，目前尚不清楚。 本實(shí)驗(yàn)的目的在于探明：1、正常骨髓液是否具有雞胚絨毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane，CAM)血管新生的作用； 2、血管內(nèi)膜損傷后的骨髓液比正常骨髓液是否具有更明顯的促血管新生作用。 [方法] 1、血清及骨髓液的獲?。?只新西蘭大白兔經(jīng)股動(dòng)脈插入2.5F球囊導(dǎo)管至腹主動(dòng)脈，球囊充氣至2～4個(gè)大氣壓，來回拖拉球囊導(dǎo)管3次，建立血管內(nèi)膜損

3、傷模型。術(shù)前從耳緣靜脈抽取靜脈血3ml，從股骨抽取骨髓3ml，離心取血清及骨髓上清液。血管內(nèi)膜損傷后第7天，同樣方法從對(duì)側(cè)耳緣和股骨抽取靜脈血和骨髓并離心，取血清及骨髓液，為損傷后的血清及損傷后的骨髓液。 2、CAM模型和分組：種蛋在37.5±0.5℃、相對(duì)濕度60％條件下孵育。孵至第7天，在照蛋燈下畫定1.0x1.0cm的開窗位置，75％酒精消毒種蛋大頭端及開窗位置，在氣室端鉆一小孔并穿透氣室殼膜，用鋸條磨切蛋殼，掀開蛋殼，注

4、射器針頭刺破殼膜，滴加2滴生理鹽水使CAM下陷，吸爾球從大頭端吸氣，使CAM與殼膜分離，去除殼膜，暴露CAM，建立CAM模型，封窗后繼續(xù)孵育。將存活雞胚隨機(jī)分為6組：①生理鹽水組(C)，②正常血清組(S)，③正常骨髓液組(B)，④損傷后血清組(IS)，⑤損傷后骨髓液組(IB)，⑥血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF，20μg/m1)組(V)。每組各10枚雞胚，其中C組作為陰性對(duì)

5、照組，V組作為陽性對(duì)照組。CAM模型建立后第二天，在每枚雞胚CAM上放一直徑為5mm的濾膜作為載體，分別加各待測物5μl。每日加樣一次，連續(xù)3天。第11天取CAM，數(shù)碼相機(jī)拍照后平鋪于載玻片上陰干保存。 3、觀察指標(biāo)：顯微鏡下計(jì)數(shù)載體周圍血管數(shù)目，根據(jù)管徑將血管分為三類：①>O.1mm為大血管；②0.1mm～0.05mm為中血管；③<0.05mm為小血管。凡血管與濾膜半徑的夾角小于45度者均予計(jì)數(shù)，而穿行、繞行的血管則不計(jì)算在內(nèi)

6、。以載體為中心，周圍血管放射狀朝向載體的生長狀態(tài)，稱為血管輻輳；主干血管向載體盤的彎曲和靠近稱之為血管的吸引現(xiàn)象。 [結(jié)果] 1、與正常血清組相比，正常骨髓液組血管總數(shù)明顯更多(47.90±3.21<,vs>28.40±3.75，P<0.001)，大血管明顯增多(9.60±3.27<,vs>3.50±1.43，P5.60±0.97，P<0.001)。該組血管新生數(shù)

7、也多于VEGF陽性對(duì)照組，包括血管總數(shù)(47.90±3.21 <,vs>33.80±4.19，P<0.001)大血管數(shù)(9.60±3.27<,vs>4.50±1.27，P6.10±1.60，P<0.001)。 2、與正常血清組及VEGF組相比，損傷血清組血管總數(shù)明顯更多(47.30±3.27<,vs>28.40±3.75，及47.30±3.27<,vs>33.80±4.19

8、，均P3.50±1.43，及4.50±1.27，均P<0.001)和中血管(12.10±2.23<,vs>6.10±1.60，及5.60±0.97，均P47.90±3.21，49.10±3.90<,vs>47.30±3.27，P>0.05)；但大

9、血管增生比正常骨髓組更多(12.30±3.06<,vs>9.60±3.27，P12.10±2.23，P