骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與血管平滑肌細(xì)胞在大鼠后肢缺血模型中促血管新生能力的比較.pdf

1、背景：細(xì)胞治療誘導(dǎo)的血管新生已發(fā)展成為治療外周血管疾病的新策略。既往研究證實(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）和血管平滑肌細(xì)胞（Vascular Smooth Muscle Cells，VSMCs）均具有分泌成血管因子及參與血管新生的能力。本研究旨在比較這兩種細(xì)胞在大鼠后肢缺血模型中促血管新生的能力。
　　 方法：使用密度梯度離心法從大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過(guò)酶消化法從大鼠胸

2、主動(dòng)脈中獲得血管平滑肌細(xì)胞。Transwell小室和MTT法用于觀察兩種細(xì)胞的條件培養(yǎng)基對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs）和血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移功能的影響。在無(wú)血清缺氧環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞以對(duì)比兩種細(xì)胞在缺氧環(huán)境的存活率。結(jié)扎大鼠左側(cè)股動(dòng)脈及其分支建立后肢缺血模型，并將這些大鼠隨機(jī)分為三組，即MSCs組，VSMCs組及PBS組，分別在大鼠缺血后肢肌內(nèi)注射相同數(shù)量

3、的MSCs或VSMCs（每只大鼠2.5×106）或同等劑量的PBS。細(xì)胞移植后3周，堿性磷酸酶染色法顯示毛細(xì)血管，用毛細(xì)血管數(shù)量和肌纖維的比值表示毛細(xì)血管密度。抗CD3的多克隆抗體顯示組織內(nèi)T淋巴細(xì)胞用以評(píng)價(jià)局部同種異體免疫排斥反應(yīng)。同時(shí)，還檢測(cè)了缺血組織內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：兩種條件培養(yǎng)基均具有促進(jìn)HUVECs和VSMCs的增殖和遷移的作用。兩種細(xì)胞對(duì)缺氧刺激的耐受力相同。

4、缺血組織中的毛細(xì)血管密度在MSCs組明顯高于VSMCs組（2.49±0.154 vs.1.8±0.146，P<0.05），在VSMCs移植組中可較對(duì)照組顯著提高（1.8±0.146 vs.1.42±0.066，P<0.05）。兩種細(xì)胞移植組中均并未發(fā)現(xiàn)明顯的免疫排斥反應(yīng)。與VSMCs移植相比，MSCs移植組的大鼠缺血組織可表達(dá)較高水平的VEGF和HGF。
　　 結(jié)論：本研究證明MSCs、VSMCs作為治療肢體缺血的候選細(xì)胞是安全