奧沙利鉑對人肝癌細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察奧沙利鉑（Oxaliplatin，L-OHP）對野生型肝癌細(xì)胞株HepG2、突變型肝癌細(xì)胞株HuH-7體外增殖和周期的影響，同時觀察CyclinD1、CDK2、CDK4、p16、p21、p53表達(dá)的變化，為其應(yīng)用于原發(fā)性肝細(xì)胞癌的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：采用人肝癌細(xì)胞株HepG2、HuH-7作為研究對象，MTT法檢測不同濃度和不同作用時間的L-OHP對細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；倒置顯微鏡觀察L-OHP作用后細(xì)胞形態(tài)的

2、改變；流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測L-OHP誘導(dǎo)HepG2、HuH-7細(xì)胞周期阻滯的作用；RT-PCR檢測 L-OHP作用后，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子 CyclinD1、CDK2、CDK4、 p16、p21、p53在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化；Western blot方法觀察L-OHP對CyclinD1、CDK2、CDK4、 p16、p21、p53蛋白表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：1. MTT結(jié)果顯示L-OHP對HepG2、HuH-7細(xì)胞增殖抑制率隨藥

3、物濃度增加及作用時間延長有升高趨勢，呈時間劑量依賴性。2.L-OHP作用后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞變圓、脫壁，并聚集成團(tuán)。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測到L-OHP能夠誘導(dǎo)HepG2、HuH-7細(xì)胞阻滯于細(xì)胞周期的S期，兩種細(xì)胞S期細(xì)胞的比例均隨濃度增加和時間延長而顯著增多。4. L-OHP作用后HepG2、HuH-7細(xì)胞mRNA水平的表達(dá)改變：（1）L-OHP下調(diào)HepG2、HuH-7細(xì)胞CDK4和CyclinD1的表達(dá)。（2）L-OHP上調(diào)兩種

4、細(xì)胞p21的表達(dá)。（3）對兩種細(xì)胞CDK2和p16表達(dá)均無明顯改變。（4）對HepG2細(xì)胞L-OHP能上調(diào)p53表達(dá)，而對HuH-7細(xì)胞L-OHP低濃度上調(diào)p53表達(dá)而高濃度下調(diào)p53表達(dá)。5. L-OHP作用后，兩種細(xì)胞蛋白表達(dá)水平與mRNA水平是一致的。
　　結(jié)論：L-OHP能有效抑制人肝癌細(xì)胞的增殖并能夠引起肝癌細(xì)胞阻滯于S期，其分子機(jī)制與CDK4、CyclinD1、p21及p53的表達(dá)變化有關(guān)。這些分子機(jī)制有助于我們進(jìn)一步