大鼠皮膚挫傷后自體吞噬和代謝物變化與損傷經(jīng)歷時(shí)間的研究.pdf

1、目的：1．研究大鼠皮膚損傷后局部組織和細(xì)胞中Beclinl(自噬誘導(dǎo)蛋白)、LC3(自噬標(biāo)記蛋白)的表達(dá)，觀察大鼠皮膚損傷后局部細(xì)胞自體吞噬現(xiàn)象的變化；研究Beclinl、LC3損傷后表達(dá)的時(shí)序性，探討在法醫(yī)學(xué)損傷經(jīng)歷時(shí)間推斷中的應(yīng)用。 2．運(yùn)用核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)技術(shù)檢測(cè)大鼠皮膚損傷后局部代謝物的變化，探討該檢測(cè)技術(shù)在法醫(yī)學(xué)損傷研究中的應(yīng)用。 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成正

2、常組及損傷組，每組7～10只；損傷組按皮膚挫傷后致處死時(shí)間的不同分為損傷3小時(shí)組、6小時(shí)組、12小時(shí)組、18小時(shí)組、24小時(shí)組、3天組、5天組、7天組、10天、14天組及死后損傷組；皮膚挫傷方法為：用止血鉗夾住背部皮膚致皮下出血。以下為各部分的實(shí)驗(yàn)方法： 實(shí)驗(yàn)一：大鼠皮膚挫傷后細(xì)胞自噬現(xiàn)象的觀察。利用免疫印跡技術(shù)分析皮膚挫傷后局部自噬相關(guān)蛋白Beclinl、LC3表達(dá)的變化。 實(shí)驗(yàn)二：大鼠皮膚挫傷后局部細(xì)胞內(nèi)Beclin

3、l、LC3表達(dá)時(shí)序性研究。通過(guò)免疫組化方法觀察大鼠皮膚挫傷不同時(shí)間段后損傷皮膚中細(xì)胞內(nèi)Beclinl、LC3的表達(dá)；并通過(guò)圖像采集、統(tǒng)計(jì)分析，研究細(xì)胞損傷后Beclinl、LC3表達(dá)量與損傷經(jīng)歷時(shí)間的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)三：大鼠皮膚挫傷后代謝物變化與損傷經(jīng)歷時(shí)間的研究。皮膚組織樣品置于高分辨率魔角旋轉(zhuǎn)(high-resolution magic angle spinning，HRMAS)探頭上進(jìn)行檢測(cè)；使用預(yù)飽和(脈沖序列：zgpr)和

4、CPMG(脈沖序列：cpmgpr)兩種方法分別對(duì)皮膚組織的核磁共振譜進(jìn)行分析。 結(jié)果：1．損傷2周內(nèi)皮膚組織相比正常皮膚組織兩種蛋白的表達(dá)呈顯著變化：Beclinl表達(dá)增多；LC3 IF/LC3 I值增高。 2．Beclinl、LC3表達(dá)于大鼠上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，少見表達(dá)于皮下組織的各細(xì)胞內(nèi)；大鼠皮膚挫傷6小時(shí)后局部表皮細(xì)胞Beclinl、LC3表達(dá)開始增多，在挫傷18小時(shí)、1天、3天、5天、7天、10天呈強(qiáng)表達(dá)，傷后14

5、天表達(dá)減弱。 3．損傷大鼠、非損傷大鼠皮膚組織的NMR圖譜之間存在差異，表現(xiàn)在波峰數(shù)量、位置等方面的改變，局部亦觀察到新的波譜。 結(jié)論：1．皮膚損傷后局部細(xì)胞自體吞噬增強(qiáng)，細(xì)胞的自體吞噬是細(xì)胞應(yīng)對(duì)損傷的一種反應(yīng)。 2．損傷后Beclinl、LC3表達(dá)與損傷經(jīng)歷時(shí)間呈較強(qiáng)的相關(guān)性；Beclinl、LC3可作為法醫(yī)學(xué)損傷經(jīng)歷時(shí)間推斷的生物學(xué)指標(biāo)。 3．運(yùn)用核磁共振技術(shù)對(duì)組織中代謝物的檢測(cè)可為法醫(yī)學(xué)損傷研究提供新的思路