鵝胚母源抗體吸收規(guī)律的研究.pdf

1、卵黃抗體即卵黃免疫球蛋白就是卵黃中的γ－卵黃球蛋白，由于其蛋白質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)、免疫學(xué)性質(zhì)等方面與哺乳動(dòng)物IgG存在一定差異，所以在免疫學(xué)領(lǐng)域把由禽卵黃中獲得的抗體稱為卵黃免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，簡稱IgY)。卵黃抗體在組成上以IgG為主，也含有少量的IgM和IgA。在禽類，母代可以通過卵子將自身的免疫球蛋白傳遞給子代，對(duì)子代起到保護(hù)作用。因此，對(duì)母源抗體特別是IgG的研究，對(duì)禽類的免疫學(xué)研究具有一定的

2、意義。 本試驗(yàn)分兩部分進(jìn)行，首先建立能對(duì)IgG定量的雙抗體夾心ELISA，包括鵝IgG的提取(飽和硫酸銨法和Sephodex-G200法)，鼠抗鵝IgG抗體的制備，兔抗鵝酶標(biāo)抗體的制備、參考陰性血清的制備(飽和硫酸銨法)、參考陰性卵黃的制備(水稀釋法和氯仿法)。 ELISA方抗體包被時(shí)間，樣品反應(yīng)時(shí)間、酶標(biāo)抗體反應(yīng)時(shí)間等各試驗(yàn)條件的確定，ELISA檢測方法敏感性、特異性、重復(fù)性的檢驗(yàn)。在驗(yàn)證該ELISA方法成熟后，分別用

3、參考陰性血清和參考陰性卵黃做稀釋液，在此稀釋液中加入不同濃度的鵝IgG，建立鵝IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線。 然后對(duì)吉林白鵝品系鵝進(jìn)行樣品采集。卵黃采樣按如下方法進(jìn)行，孵化前采集6份卵黃樣品，從4日齡開始隔日采樣，每次采樣6份，采集樣品用無菌蒸餾水7倍稀釋后凍存于-20℃冰箱中。至34日齡卵黃消失采樣工作結(jié)束。血清的采集按如下方法進(jìn)行，從14日齡開始，隔日采樣，每次采樣6份，樣品采集后凍存于-20℃冰箱中。 采集所有樣品后，用建立的雙

4、抗體夾心ELISA方法分別對(duì)卵黃和血清樣品進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果利用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成蛋白含量。 研究發(fā)現(xiàn)，卵黃中的IgG含量在整個(gè)孵化期中，呈現(xiàn)平穩(wěn)成下降趨勢(shì)，卵黃的體積也相應(yīng)減小，即卵黃中抗體總量的變化同時(shí)與卵黃中抗體濃度和卵黃體積相關(guān)。 卵黃中的抗體含量由孵化前的4311.196μg/ml下降至卵黃消失前的2821.363μg/ml。卵黃的體積在20日齡之前變化不是很明顯，但22日齡以后，卵黃的體積急劇下降，據(jù)此推測大量抗