大鼠供肝熱缺血損傷誘發(fā)肝移植術后膽汁淤積的實驗研究.pdf

1、目的：探討肝移植中供肝熱缺血損傷誘發(fā)肝移植術后膽汁淤積的機制。 方法：建立近交系大鼠動脈化原位肝移植模型，實驗分為4組：熱缺血0分鐘(W0)、熱缺血15分鐘(W15)、熱缺血30分鐘(W30)肝移植組和對照組(C)，每組均為24只大鼠，各組分別在術后3、7、14和30天各取6只大鼠剖腹獲取肝組織標本及取血進行定向實驗，并以30天剖殺組觀察術后存活情況。對所獲取標本分別進行常規(guī)組織學和肝臟酶學檢查，利用Real-timePCR技術

2、檢測肝組織標本中細胞角蛋白8、18(cytokeratin，CK)、鈉/牛磺酸共同轉運多肽(Na+/taurocholatecotransporter，NTCP)和膽鹽輸出泵(bilesaltexportpump，BESP)分子mRNA轉錄水平，采用免疫組化技術檢測CK8、CK18、BSEP和Ki-67蛋白的表達變化，利用激光共聚焦顯微鏡檢測肝細胞縫隙連接蛋白Cx-32(connexin-32)的變化。 結果：1.W0、W15和

3、W30組術后長期生存率分別為100.0％(6/6)、83.3％(5/6)、66.7％(4/6)。 2.常規(guī)組織病理結果顯示：隨著供肝熱缺血時間的延長，移植肝損傷加重，并且恢復過程也延長。 3.移植組和對照組術后第3、7、14和30天血清丙氨酸轉氨酶(alaninetransaminase，ALT)和天冬氨酸轉氨酶(aspartatetransaminase，AST)均無顯著性改變。 4.血清堿性磷酸酶(alkal

4、inephosphates，ALP)結果顯示，隨著供肝熱缺血時間的延長，術后ALP逐漸增高，14天達到高峰后逐漸下降。術后第3、7、14、30血清ALP與供肝熱缺血時間具有顯著相關性。 5.肝移植術后早期肝細胞Ki-67表達水平隨供肝熱缺血時間的延長而增高，術后14天恢復正常。同樣膽管細胞Ki-67表達水平在移植術后早期也明顯增高，但其下降速度較肝細胞緩慢。 6.術后早期，移植組CK8mRNA轉錄水平和肝細胞CK8蛋白表

5、達水平，隨供肝熱缺血時間的延長表達減少，并于術后14天恢復正常。CK18mRNA轉錄水平和肝細胞CK18蛋白表達水平也呈現(xiàn)類似變化。 7.術后早期，隨著供肝熱缺血時間的延長，膽管上皮細胞CK8和CK18表達水平逐漸下降，但于術后7天恢復正常。 8.移植術后14天內，移植組Cx-32表達在均明顯低于對照組，且隨著供肝熱缺血時間的延長，表達逐漸下降。 9.移植組與對照組術后相同時點不同供肝熱缺血時間的移植組間的BSE

6、PmRNA轉錄水平和蛋白表達水平無明顯差別。NTCPmRNA轉錄水平也呈現(xiàn)類似變化。 結論：1.近交系大鼠動脈化原位肝移植模型能夠很好的反映肝移植過程中的供肝熱缺血損傷，適合供肝熱缺血誘發(fā)的肝移植術后膽汁淤積的實驗研究。 2.來自于無心跳供體的大鼠肝臟在熱缺血30分鐘以內是安全的，移植術后可以長期存活。 3.肝移植過程中供肝熱缺血主要損傷肝細胞，并隨著供肝熱缺血時間的延長移植肝細胞損傷加重，肝細胞功能恢復早于其形