褪黑素減輕大鼠DCD肝移植術(shù)后ERS相關(guān)損傷的實驗研究.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　目前肝移植已經(jīng)成為治療終末期肝病的常規(guī)手術(shù)。移植后多種因素能夠?qū)е乱浦哺螕p傷，其中肝臟缺血再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury，IRI)是導(dǎo)致移植肝早期無功能及急、慢性排斥反應(yīng)的重要原因。而心臟死亡供體(donation aftercardiac death，DCD)供肝不可避免地要經(jīng)歷一段熱缺血損傷，使肝臟對于IRI更加敏感，更大的加劇了移植后肝細胞損傷，更容易出現(xiàn)移植后肝臟無功能和

2、膽道損傷。近年來研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulurn stress，ERS）及其介導(dǎo)的細胞凋亡在器官移植后缺血再灌注、慢性缺血、炎性反應(yīng)等損傷中起到重要作用。褪黑素(melatonin，MEL)是松果腺分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有對生物的晝夜節(jié)律、性成熟及生殖、衰老、免疫反應(yīng)、腫瘤、氧化應(yīng)激等均有調(diào)節(jié)作用，因其廣泛的病理生理功能及低毒副作用而受到廣泛的關(guān)注。本研究擬采用大鼠DCD原位肝移植模型，探討肝移植大

3、鼠肝組織ERS相關(guān)分子GRP-78及CHOP表達，以及MEL對GRP-78及CHOP表達的影響，及MEL對移植肝的保護作用。
　　材料方法：
　　采用“磁環(huán)法”建立大鼠原位肝移植模型。采用剪破膈肌誘導(dǎo)氣胸并鉗夾心臟基底部誘導(dǎo)心臟停跳，熱缺血30分鐘后獲取供肝，模擬心臟死亡供體以建立大鼠DCD原位肝移植模型。
　　供受體均采用健康清潔SD雄性大鼠，分為假手術(shù)組（Sham組），原位肝移植組(OLT組)，原位肝移植+褪黑素處

4、理組(OLT+MEL組)，DCD原位肝移植組（DCD組），DCD原位肝移植組+褪黑素處理組(DCD+MEL組)，每組各8只。大鼠于手術(shù)處理24h后麻醉處死，留取下腔靜脈血檢測血清ALT及AST水平，取肝臟組織標本，應(yīng)用RT-PCR方法檢測GRP-78及CHOP mRNA表達，應(yīng)用WesternBlot方法檢測GRP-78及CHOP蛋白表達情況及HE染色方法評估肝臟損傷程度。
　　實驗結(jié)果：
　　1、GRP-78及CHOP m

5、RNA在肝臟組織中的表達
　　與Sham組相比，OLT組肝組織GRP-78及CHOP的mRNA水平表達明顯增高(P＜0.01);與OLT組相比，OLT+MEL組GRP-78及CHOP的mRNA水平表達減少(P＜0.05);與OLT組相比，DCD組GRP-78及CHOP的mRNA水平表達明顯增高(P＜0.01);與DCD組相比，DCD+MLT組GRP-78及CHOP的mRNA水平表達減少(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

6、>　　2、GRP-78及CHOP蛋白在肝臟組織中的表達
　　與Sham組相比，OLT組肝組織GRP-78及CHOP的蛋白水平表達明顯增高(P＜0.01);與OLT組相比，OLT+MEL組GRP-78及CHOP的蛋白水平表達減少(P＜0.05);與OLT組相比，DCD組GRP-78及CHOP的蛋白水平表達明顯增高(P＜0.01);與DCD組相比，DCD+MLT組GRP-78及CHOP的蛋白水平表達減少(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計

7、學(xué)意義。
　　3、肝功能檢測
　　血清ALT及AST水平是反應(yīng)肝臟功能受損程度的重要指標。與Sham組相比，OLT組血清ALT及AST水平顯著升高(P＜0.01);與OLT組相比，OLT+MEL組血清ALT及AST水平明顯下降(P＜0.05);與OLT組相比，DCD組血清ALT及AST水平明顯增高(P＜0.01);與DCD組相比，DCD+MLT組血清ALT及AST水平減少(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
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8、、肝臟病理變化
　　Sham組HE染色基本同正常肝臟組織，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索排列有序，未見肝細胞水腫變性及肝細胞凋亡和壞死等現(xiàn)象。OLT組HE染色可見肝索排列紊亂，肝細胞水腫氣球樣變明顯，肝竇內(nèi)皮細胞腫脹明顯，有單個肝細胞出現(xiàn)細胞皺縮，嗜酸，核固縮。OLT+MEL組HE染色可見肝索排列紊亂程度減輕，肝細胞水腫減輕，未見明顯細胞凋亡壞死。DCD組HE染色可見肝索排列紊亂，肝細胞水腫氣球樣變明顯，肝竇內(nèi)皮細胞腫脹明顯，可見匯管區(qū)塌陷