花生藤中白藜蘆醇的提取分享及抗氧化活性研究.pdf

1、白藜蘆醇（簡稱Res），又稱蔗三酚，化學(xué)名為反式-3，4′，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(3，4′，5-trihydrolystilbence)，廣泛存在于天然植物體內(nèi)，如虎杖、葡萄（皮、籽）、桑葚、花生、鳳梨等，它是植物體內(nèi)用于抵抗病原侵染的多酚物質(zhì)，具有抗氧化、降血脂、預(yù)防心腦血管疾病以及抗癌等重要生物活性。以白黎蘆醇提取物生產(chǎn)的功能食品在國際市場上深受歡迎，市場需求量大。目前國外主要從葡萄和葡萄籽中進(jìn)行提取，國內(nèi)則主要從中藥虎杖中

2、提取，但都面臨原料資源緊缺、成本高等問題。據(jù)報道花生根莖葉中均含有白藜蘆醇，而且含量比在葡萄皮（籽）中高數(shù)十倍到數(shù)百倍，但是目前花生藤還無工業(yè)規(guī)模利用，只有部分用作動物飼料，其余作為廢棄物丟棄，或燃燒于田間，既浪費了農(nóng)業(yè)資源，又造成環(huán)境污染。因此，研究和開發(fā)花生藤（包括花生根、莖、葉）中的白藜蘆醇對擴(kuò)大白藜蘆醇的植物資源及提高花生副產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)價值都具有重要意義。
　　 本文以花生藤為原料，對花生藤中白藜蘆醇的分析方法、提取工藝、

3、分離純化及抗氧化活性等進(jìn)行研究，為花生藤的開發(fā)利用提供依據(jù)。主要內(nèi)容如下：
　　 研究花生藤中白藜蘆醇的高效液相色譜（HPLC）分析方法?；ㄉ偬崛∥镏须s質(zhì)多，尤其是脂溶性雜質(zhì)對色譜柱污染大，嚴(yán)重影響色譜柱的使用壽命，建立花生根、莖、葉一步硅膠柱預(yù)處理、HPLC法測定其中白藜蘆醇含量的方法。預(yù)處理采用氯仿：丙酮：乙醇：水(4：4：0.5：0.2，V/V/V/V)洗脫，TLC法跟蹤鑒定，收集白藜蘆醇組分HPLC法分析。色譜條件為：

4、色譜柱為Hypersil ODS-2（4.6mm×250mm，5μm），流動相為甲醇：水(45:55，V/V)，流速為0.8mL/min，柱溫為35℃，紫外檢測波長為306nm?；貧w方程為：Y=9×106X-340693，線性范圍：0.228～1.14μg（其相關(guān)系數(shù)R=0.9999）。經(jīng)過一步硅膠柱預(yù)處理，HPLC檢測色譜圖中除了白藜蘆醇峰外，雜質(zhì)峰很少，預(yù)處理凈化效果好。該方法簡便，快速，準(zhǔn)確。測得山東、江蘇和河北產(chǎn)花生藤混合物中白

5、藜蘆醇的含量分別為903.69μg/g，116.21μg/g和88.69μg/g;以山東產(chǎn)花生藤含量為最高，高于文獻(xiàn)報道。對山東產(chǎn)花生藤不同部位花生根、莖、葉中白藜蘆醇的含量進(jìn)行了測定，結(jié)果分別為223.08μg/g，1211.19μg/g和429.79μg/g，以莖中含量為最高。
　　 研究花生藤中白藜蘆醇溶劑提取法的優(yōu)化工藝。目前關(guān)于花生藤提取工藝優(yōu)化的報道不多，且多用紫外分光光度法測定白藜蘆醇的含量。經(jīng)作者HPLC檢測發(fā)現(xiàn)

6、在波長306nm處花生藤提取樣品在4min前有一大的雜質(zhì)峰，雜質(zhì)的峰面積大大高于白藜蘆醇的峰面積，如用紫外分光光度法測定則不能準(zhǔn)確反映白藜蘆醇的提取量，因此本文采用傳統(tǒng)的溶劑浸提法提取白藜蘆醇，以白藜蘆醇的提取量為考察指標(biāo)，HPLC法測定提取樣品中白藜蘆醇的提取量，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交實驗，考察溫度、乙醇濃度和液料比對白藜蘆醇提取效果的影響。溫度是影響白藜蘆醇的提取量的顯著性因素，溶劑提取法的優(yōu)化工藝參數(shù)為：溫度50℃，乙醇濃

7、度60％，液料比25:1，提取時間1h，提取次數(shù)1次，在此條件下測得白藜蘆醇的提取量為855.05μg/g原料。3次驗證試驗表明該工藝穩(wěn)定，可用于花生藤中白藜蘆醇的提取。
　　 雙水相體系萃取白藜蘆醇的理論研究。已有文獻(xiàn)報道利用雙水相體系純化虎杖中的白藜蘆醇，但未見雙水相體系萃取白藜蘆醇的理論研究報道，因此本文以分配系數(shù)和回收率為考察指標(biāo)，采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測定，確定萃取白藜蘆醇的最佳雙水相體系為乙醇-硫酸銨-水，并采用

8、濁點滴定法確立了此雙水相體系的溶解度相圖，同時對影響雙水相體系萃取白藜蘆醇效果的因素進(jìn)行了考察。研究結(jié)果表明乙醇和硫酸銨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)是影響雙水相萃取的主要因素。
　　 建立雙水相萃取花生藤中白藜蘆醇的工藝。經(jīng)過雙水相體系萃取、除鹽反萃取工藝后，白藜蘆醇集中在上層萃取液中且回收率為97.5%，HPLC法測得樣品中白藜蘆醇的含量為1.83%，與粗提物中白藜蘆醇的含量(0.2%)相比，提高了9倍多?？梢?，此雙水相體系純化工藝不但避免使用

9、乙酸乙酯等有毒試劑，而且提高了樣品純度，可用于花生藤中白藜蘆醇的初步純化。
　　 考察花生藤白藜蘆醇粗提物、雙水相純化后樣品和含量為96.93%的白藜蘆醇樣品的抗氧化活性，并與VC進(jìn)行對比。采用分光光度法測定樣品對2，2-二苯基-1-苦肼基自由基(DPPH多，羥自由基(·OH)和超氧陰離子自由基(O2·-)的清除效果。結(jié)果表明花生藤白藜蘆醇粗提物、雙水相純化后樣品和含量為96.93%的白藜蘆醇樣品清除自由基的能力隨樣品濃度的增加

10、而增強(qiáng)，樣品濃度小于2.664mg/mL時花生藤白藜蘆醇粗提物清除自由基的效果優(yōu)于雙水相純化后樣品，但不及含量為96.93%的白藜蘆醇樣品；樣品濃度達(dá)到2.664mg/mL后，三個樣品清除自由基的能力趨于一致?；ㄉ侔邹继J醇粗提物清除DPPH·、·OH和O2·-自由基的IC50值分別為0.0529mg/mL、0.589mg/mL和0.610mg/mL;雙水相純化后樣品清除DPPH·、·OH和O2·-自由基的IC50值分別為0.0625m

11、g/mL、1.684mg/mL和2.469mg/mL;含量為96.93%的白藜蘆醇樣品清除DPPH·、·OH和O2·-自由基的IC50值分別為0.00624mg/mL、0.485mg/mL和0.200mg/mL;VC清除DPPH·、·OH和O2·-自由基的IC50值分別為0.009mg/mL、0.255mg/mL和0.190mg/mL，可見三個樣品清除自由基的能力均稍弱于VC；三個樣品對DPPH·、·OH和O2·-的清除能力次序一致：含