促紅細(xì)胞生成素對人單核細(xì)胞鐵調(diào)蛋白hepcidin和前炎癥因子的影響及機理.pdf

1、[研究背景]
　　 目前認(rèn)為,慢性病貧血(ACD)的發(fā)病機制是由原發(fā)病啟動的免疫反應(yīng)所介導(dǎo):異常升高的炎性細(xì)胞因子主要是IL-6通過上調(diào)肝臟hepcidin,導(dǎo)致鐵利用障礙,引發(fā)貧血；此外,可直接抑制紅系前體細(xì)胞增殖分化,縮短紅細(xì)胞壽命,鈍化對EPO的反應(yīng),干擾鐵代謝相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄等導(dǎo)致慢性病貧血。單核細(xì)胞是慢性病貧血中產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的主要來源,同時是鐵儲存細(xì)胞,接受hepcidin的調(diào)控,在ACD的發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用,近年來

2、研究顯示,單核細(xì)胞與肝臟相似,受到炎癥刺激后hepcidin mRNA表達(dá)明顯增加。單核細(xì)胞的hepcidin也對鐵代謝有調(diào)節(jié)作用,同時在ACD患者中表達(dá)升高,與貧血和升高的IL-6明顯相關(guān),顯示其可能在患者體內(nèi)參與ACD的發(fā)病。促紅細(xì)胞生成素(EPO)是目前治療ACD的主要手段,通過與EPO受體結(jié)合刺激造血、抑制肝臟hepcidin以及降低炎癥因子等發(fā)揮治療作用。但是EPO降低hepcidin的具體機制尚不清楚,其降低肝臟hepcid

3、in可能與下調(diào)C/EBPa,抑制STAT3的磷酸化有關(guān):但是否存在其他的信號途徑、對單核細(xì)胞hepcidin是否也有類似的降低作用和分子機制并不清楚,此外,EPO降低前炎癥因子的機制也并不清楚。多發(fā)性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤是腫瘤相關(guān)ACD的代表性疾病,骨髓瘤患者血清和尿hepcidin水平升高,非霍奇金淋巴瘤則缺乏相關(guān)研究。對于這兩種疾病,單核細(xì)胞hepcidin是否升高,是否在ACD中發(fā)揮作用,尚不清楚。
　　 [研究目的]<

4、br>　　 1觀察EPO是否能降低單核細(xì)胞hepcidin并探討其分子學(xué)機制。
　　 2探討EPO降低IL-6的分子機制。
　　 3探討單核細(xì)胞hepcidin在MM和NHL患者相關(guān)ACD中可能發(fā)揮的作用。
　　 [研究方法]
　　 1 IL-6誘導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞,Real time PCR法檢測hepcidin；加入EPO,觀察其對hepcidin的影響。Western blot免疫印跡法檢測he

5、pcidin蛋白及信號分子:C/EBPa、Smad1/5/8、P-Smad1/5/8及P-STAT3,加入EPOR抗體,觀察對EPO的拮抗作用。
　　 2 LPS誘導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞和人原代單核細(xì)胞,Real time PCR法檢測IL-6及TNF-a表達(dá)。Western blot法檢測信號分子PARP-1,加入EPOR抗體或PARP-1抑制劑3AB,觀察對EPO的拮抗作用及信號蛋白的影響。
　　 3收集多發(fā)性骨髓瘤、

6、非霍奇金淋巴瘤患者的臨床資料及血清,ELISA法檢測患者血清IL-6及TNF-a的濃度。
　　 4磁珠分選法分離外周血CD14+單核細(xì)胞,Real time PCR實時定量法檢測單核細(xì)胞hepcidin、IL-6、TNF-a及C/EBPa的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1 EPO可降低IL-6誘導(dǎo)的THP-1單核細(xì)胞hepcidin mRNA表達(dá)及蛋白量；同時降低C/EBPa、P-Smad1/5/8、P-STAT

7、3,EPOR抗體可拮抗EPO對hepcidin及信號蛋白的影響。
　　 2 EPO可降低LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞和人原代單核細(xì)胞IL-6和TNF-a的表達(dá),同時降低PARP-1的蛋白量,EPOR抗體及3AB均對可拮抗EPO對IL-6及PARP-1的下降作用。
　　 3 MM患者單核細(xì)胞hepcidin的表達(dá)高于正常,初治者與Hb、TSAT％負(fù)相關(guān),與SF、體內(nèi)IL-6水平、CRP及β2微球蛋白正相關(guān),與體內(nèi)TNF-a水

8、平、LDH無關(guān)聯(lián)。單核細(xì)胞CEBPa表達(dá)與hepcidin水平正相關(guān)。
　　 4 NHL患者單核細(xì)胞hepcidin表達(dá)高于正常,初治組與Hb負(fù)相關(guān),與體內(nèi)IL-6水平、CRP、LDH正相關(guān),與TSAT％、SF及體內(nèi)TNF-a水平無關(guān)聯(lián)。單核細(xì)胞CEBPa表達(dá)與hepcidin水平無關(guān)。
　　 [結(jié)論]
　　 1 EPO可從基因水平和蛋白水平明顯降低IL-6誘導(dǎo)的單核細(xì)胞hepcidin；其可能的分子機制:通過與

9、EPOR結(jié)合,降低信號分子C/EBPa,減少Smad1/5/8及STAT3磷酸化。
　　 2 EPO可明顯降低LPS誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-6和TNF-a mRNA的表達(dá),EPO可能是通過與EPOR結(jié)合,抑制信號分子PARP-1,實現(xiàn)對IL-6的下調(diào)作用。
　　 3多發(fā)性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤患者單核細(xì)胞hepcidin mRNA表達(dá)升高,在初治患者中與血紅蛋白存在關(guān)聯(lián),可能是導(dǎo)致其ACD的原因之一;單核細(xì)胞hepcidin