紅細胞生成素對raw264.7細胞炎癥反應及氧化應激的影響

1、中山大學碩士學位論文紅細胞生成素對RAW264.7細胞炎癥反應及氧化應激的影響姓名：皮婧靜申請學位級別：碩士專業(yè)：內科學指導教師：黃湖輝20080530◇塞。。忽慧曼 紅細胞生成素對R A W 2 6 4 ．7 細胞炎癥反應及氧化應激的影響研究目的本研究探討E P O 預孵育的R A W 2 6 4 ．7 細胞經(jīng)L P S 刺激后，炎癥因子T N F ．Q 、I L ．11 3 及T G F 一1 3I m R N A 表達、蛋白分泌以

2、及細胞內R O S 含量的變化情況，以及E P O 預孵育濃度和時間的影響，并探討上述作用的可能機制材料與方法R A W 2 6 4 ．7 細胞，予含1 0 ％胎牛血清的D M E M 高糖培養(yǎng)基，置3 7 ℃，5 ％C 0 2的恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的R A W 2 6 4 ．7 細胞接種入六孔板，分別檢測不同濃度梯度和不同時間梯度L P S 刺激R A W 2 6 4 ．7 細胞后n 嚇．Q 、I L ．11 3 、T G

3、F ．Bl 的m R N A 表達水平，結合文獻選出合適的L P S 刺激濃度和檢測時間。E P O對R A W 2 6 4 ．7 細胞炎癥反應和氧化應激影響的實驗，根據(jù)E P O 預孵育時間不同分為I 和I I 兩個大組，I 組E P O 預孵育2 小時，I I 組預孵育4 小時。每組分為：空白對照組( 正常培養(yǎng)基孵育) 、L P S 處理組( 0 ．5 u g ／m l L P S 刺激8 小時) 和E P O 處理組( E P O

4、 預孵育后O ．5 u ∥m l L P S 刺激8 小時) ，E P O 處理組又分為A 、B 、C 、D 四組，E P O 濃度分別為5 U ／m l 、1 0 U ／m l 、5 0 U ／m l 、1 0 0 U ／m l 。用R T - P C R和E L I S A 法分別檢測前炎癥因子n 師一Q 、I L ．11 3 、T G F ．1 3l 的m R N A 表達水平和蛋白表達水平，流式細胞儀檢測反映細胞內的氧化應激水平

5、的平均熒光強度。結果L P S 刺激R A W 2 6 4 ．7 細胞后前炎癥因子n 師．C t 、I L ．11 3 的m R N A 表達和蛋白水平以及T G F ．BI 的m R N A 水平都明顯升高( p < O ．0 5 ) 。E P O 預孵育后，上述前炎癥因子m R N A 表達和蛋白水平較L P S 刺激組都有明顯下降( p < O 。0 5 ) ，而且E P O 濃度越高，上述前炎癥因子m R N A 表

6、達和蛋白水平越低；E P O 預孵育4 小時與預孵育2 小時相比細胞內的炎癥因子的水平?jīng)]有明顯差別。E P O 預孵育后，各組細胞內R O S 含量的變化趨勢與上述炎癥因子類似。結論E P O 可下調L P S 刺激的鼬州2 6 4 ．7 細胞炎癥因子T N F —a 、I L - 11 3 、T G F 一1 3l 的m R N A 和蛋白表達，降低胞內的R O S 含量；上述作用與E P O 的濃度呈正相關；提示E P O 可劑量依