煙草高稈多葉突變株的鑒定與純化.pdf

1、2005年10月，在重慶市黔江區(qū)煙草田中發(fā)現(xiàn)一株云煙87的突變株，表現(xiàn)為株高、葉片和莖粗都遠(yuǎn)大于正常的云煙87。本研究將突變株和對(duì)照株(云煙87)用組織培養(yǎng)方法快速繁殖，2006年進(jìn)行大田種植，并對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞學(xué)觀察、生理生化特征分析和分子標(biāo)記分析，以證實(shí)該突變株是否為突變體。待其開花時(shí)，采用花藥培養(yǎng)和秋水仙素加倍的方法，建立DH體系，獲得了純合雙倍體植株。 形態(tài)學(xué)比較表明，突變株的生長(zhǎng)狀況明顯不同于對(duì)照株，其長(zhǎng)勢(shì)好

2、、植株高大、葉片繁茂、葉色略深。7月初，對(duì)照株已逐漸現(xiàn)蕾開花，但突變株到10月中旬才現(xiàn)蕾，此時(shí)突變株平均株高已達(dá)到179cm，葉數(shù)在86片以上。 染色體觀察表明，該突變株是艤倍體(2n=48)，無明顯的變異。葉片氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，突變株平均為22.2個(gè)，對(duì)照株平均為19.2個(gè)，突變株明顯多于對(duì)照株。 生理生化特征分析發(fā)現(xiàn)，突變株葉綠素a、b和總量均高于對(duì)照株；可溶性蛋白質(zhì)含量分析表明，突變株蛋白質(zhì)含量是對(duì)照株的

3、1.48倍：過氧化物酶電泳圖譜顯示突變株比對(duì)照株多1條譜帶；由可溶性蛋白SDS-PAGE電泳圖譜可見，突變株比對(duì)照株新增加了4條譜帶，同時(shí)對(duì)照株上有3條譜帶在突變株上消失。這些都表明突變株有與對(duì)照株不同的生理生化特征。 RAPD分析，用20個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增，其中有7個(gè)引物有穩(wěn)定的擴(kuò)增產(chǎn)物，且重復(fù)結(jié)果一致，而這7個(gè)引物中有4個(gè)擴(kuò)增出了多態(tài)性。SRAP分析，用88對(duì)引物擴(kuò)增，其中有82對(duì)引物有穩(wěn)定的擴(kuò)增產(chǎn)物，且重復(fù)結(jié)果一致，82對(duì)引物

4、中有22對(duì)引物能擴(kuò)增出多態(tài)性．說明突變株在DNA水平上確實(shí)發(fā)生了變異。 突變株比對(duì)照株現(xiàn)蕾時(shí)間晚3個(gè)月，推測(cè)該突變株可能是晚花變異。由于晚花變異引起突變株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期延長(zhǎng)，造成植株高大、葉片數(shù)多等突變表型。以上研究可以初步確定該突變株是一株自然發(fā)生的高稈多葉晚花型煙草突變株。 花藥培養(yǎng)研究表明培養(yǎng)基(H+0.1％活性炭)中花藥的萌發(fā)率較高、生長(zhǎng)狀況較好，相對(duì)于其他幾種培養(yǎng)基更適合花藥培養(yǎng)。說明活性炭比IAA具有更好地促進(jìn)煙

5、草花藥出苗率的作用。 誘導(dǎo)單倍體加倍。采用混培法時(shí)，在秋水仙素濃度為0.4％、處理時(shí)間為72 h時(shí)，獲得了最高誘導(dǎo)率，為28.6％；采用浸苗法時(shí)，在秋水仙素濃度為0.4％、處理時(shí)間為48 h，獲得了最高誘導(dǎo)率，為60％。因此浸苗法更有利于提高單倍體的加倍頻率，達(dá)到理想的誘導(dǎo)效果。 葉片氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體計(jì)數(shù)法顯示單倍體植株葉片氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)大多在9到11之間，平均每個(gè)保衛(wèi)細(xì)胞有10.3個(gè)葉綠體；而加倍植株葉片氣孔保