遼寧絨山羊蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)基因(PLP2)的表達(dá)研究.pdf

1、遼寧絨山羊是我國(guó)特有的禁止基因外流的寶貴遺傳資源，產(chǎn)絨量居全國(guó)第一。在前期工作中，我們通過建庫(kù)及Primer walking質(zhì)粒測(cè)通的方法克隆篩選出蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)基因(proteolipid protein2，PLP2)的全長(zhǎng)序列。為了探究該基因的功能，我們對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析（包括預(yù)測(cè)其開放閱讀框，親疏水性分析、跨膜預(yù)測(cè)分析、信號(hào)肽預(yù)測(cè)分析、磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析、二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)、進(jìn)化樹的構(gòu)建、多重序列的比對(duì)、保守結(jié)構(gòu)域搜索），Real

2、-time PCR，RT-PCR，原位雜交以及Noggin基因干擾慢病毒感染后目的基因的qPCR檢測(cè)等的一系列分析研究。
　　分析結(jié)果顯示:首先，通過生物信息學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)PLP2基因能夠編碼含有152個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，PLP2基因含有α螺旋結(jié)構(gòu)(46.05％)、延伸結(jié)構(gòu)(12.5％)和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)(41.45％)，功能位點(diǎn)分析顯示，PLP2含有MARVEL結(jié)構(gòu)域并且存在4個(gè)跨膜區(qū)，不存在信號(hào)肽，PLP2氨基酸

3、含有3個(gè)Ser、2個(gè)Tyr和1個(gè)Thr可能成為蛋白激酶磷酸化位點(diǎn);其次，通過RT-PCR檢測(cè)顯示，PLP2基因在皮膚、心臟、肝臟、腎臟、肺、脾臟中均有表達(dá)，且表達(dá)差異不是很明顯，其中皮膚中的表達(dá)含量相對(duì)較高;同時(shí)，還運(yùn)用了熒光定量PCR技術(shù)，定量的檢測(cè)其在不同時(shí)期的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在興盛期時(shí)，PLP2基因在次級(jí)毛囊的表達(dá)量約為初級(jí)毛囊的1.02倍(0.01＜P＜0.05)，在退行期時(shí)，PLP2基因的表達(dá)量仍是次級(jí)毛囊高于初級(jí)毛囊，是初級(jí)毛

4、囊的1.16倍(0.01＜P＜0.05);另外，經(jīng)過原位雜交分析，發(fā)現(xiàn)PLP2基因在內(nèi)根鞘有表達(dá)，而在外根鞘、毛干（角質(zhì)層、皮層和髓層）以及毛囊乳突中無表達(dá);最后，通過Noggin基因干擾后PLP2基因的qPCR檢測(cè)，顯示空白組的表達(dá)量是NC陰性對(duì)照的1.15倍，而noggin干擾后PLP2的表達(dá)量是NC陰性對(duì)照組的0.64倍。
　　結(jié)論:(1) PLP2基因在皮膚、心臟、肝臟、腎臟、肺、脾臟各個(gè)組織中都有表達(dá)，這說明PLP2與各