間充質干細胞膜微粒在肺動脈高壓治療中對RAS系統(tǒng)的作用研究.pdf

1、[目的]：
　　1.通過構建肺動脈高壓大鼠實驗動物模型，探討骨髓來源的間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)膜微粒(microparticles，MPs)對肺動脈高壓的干預作用。
　　2.觀察骨髓來源的間充質干細胞膜微粒在肺動脈高壓大鼠肺及心臟等組織中的影響。
　　3.探討肺動脈高壓大鼠肺組織局部及全身腎素血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin

2、system，RAS系統(tǒng))的改變，及骨髓來源的間充質干細胞膜微粒對肺動脈高壓大鼠RAS系統(tǒng)的調節(jié)作用。
　　[方法]：
　　1.采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)骨髓間充質干細胞至第三代，經鑒定后采用無血清低營養(yǎng)誘導培養(yǎng)過夜，誘導間充質干細胞釋放并收集膜微粒。
　　2.健康的8周齡SPF級雄性SD大鼠隨機分為4組:空白對照組(Nor組)、肺動脈高壓組(PAH組)、膜微粒干預組(MPs組)、膜微粒+A-779干預組(MPs+A-

3、779組)。采用一次性腹腔注射1％野百合堿50mg/Kg，以構建肺動脈高壓疾病模型;空白對照組(Nor組)通過一次性腹腔注射等量的生理鹽水。各實驗大鼠在相同濕度、溫度、光照等環(huán)境及相同喂養(yǎng)條件下飼養(yǎng)21天后:空白對照組（Nor組）及肺動脈高壓組（PAH組）在第21天始隔天尾靜脈注射0.5ml生理鹽水至第35天;膜微粒干預組（MPs組）在第21天始隔天尾靜脈注射0.5ml生理鹽水溶解配制的膜微粒30ug/只至第35天;膜微粒+A-779干

4、預組（MPs+A-779組）在第21天始隔天尾靜脈先注射0.5ml生理鹽水溶解配制的A-779120ug/只預處理，然后再注射0.5ml生理鹽水溶解配制的膜微粒30ug/只至第35天。第35天，經右側頸靜脈置右心導管測量各實驗組大鼠血流動力學變化，留取血液標本后處死并取大鼠肺、心臟等組織，測量右心室肥厚指數(shù)(RV/LV+S)、肺小動脈管壁厚度指數(shù)(TI)及肺小動脈管腔面積指數(shù)(AI);肺組織及右室病理切片行HE染色、Masson染色;E

5、LISA法測定各實驗組大鼠肺組織勻漿及血清Ang-(1-7)、Ang-Ⅱ的濃度;RT-PCR測定各實驗組大鼠肺組織ACE2、ACE mRNA表達水平。
　　[結果]：
　　1.SD大鼠生長狀況:Nor組及MPs組均較PAH組及MPs+A-779組生長發(fā)育良好，食欲良好，無消瘦，呼吸平穩(wěn)，實驗過程中均無死亡例數(shù);PAH組實驗過程中死亡例數(shù)3例;MPs+A-779組實驗過程中死亡例數(shù)2例。
　　2.血流動力學改變:PAH組

6、平均肺動脈壓(mPAP)較Nor組顯著升高(P＜0.01);MPs組mPAP較PAH組明顯下降(P＜0.01)，而與Nor組相比稍升高，但兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);MPs+A-779組mPAP較PAH組下降(P＜0.01)，但與Nor組及MPs組相比均明顯升高（P＜0.01）。
　　3.右室肥厚指數(shù)(RV/LV+S)改變:PAH組RV/LV+S較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組RV/LV+S較PAH組明顯

7、下降(P＜0.01)，而與Nor組相比，RV/LV+S有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);MPs+A-779組RV/LV+S較Nor組及MPs組明顯升高(P＜0.01)，而與PAH組相比，RV/LV+S有所下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4.HE染色:肺組織HE染色:PAH組肺小動脈厚度指數(shù)(TI)及面積指數(shù)(AI)均較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組TI及AI均較PAH組明顯下降(P＜0.0

8、1)，但與Nor組相比，TI及AI均有所升高，但兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);MPs+A-779組與Nor組、MPs組相比，TI及AI均顯著升高(P＜0.01)，與PAH組相比，TI及AI均下降(P＜0.05)。肺組織炎癥細胞浸潤情況:PAH組及MPs+A-779組肺小動脈周圍可見中、大量淋巴細胞浸潤，而在Nor組及MPs組淋巴細胞浸潤情況有所緩解。右室HE染色:PAH組及MPs+A-779組右室心肌細胞肥大、排列紊亂，可見炎

9、癥細胞浸潤，而Nor組及MPs組則有所緩解。
　　5.Masson三色染色:PAH組肺組織及右室膠原纖維容積分數(shù)均較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組肺組織及右室膠原纖維容積分數(shù)均較PAH組明顯降低(P＜0.01)，與Nor組相比，肺組織膠原纖維容積分數(shù)升高(P＜0.05)，同時右室膠原纖維容積分數(shù)也升高(P＜0.01); MPs+A-779組肺組織及右室膠原纖維容積分數(shù)均較Nor組及MPs組升高(P＜0.01)，同時較

10、PAH組下降（P＜0.01）。
　　6.ELISA檢測:肺組織局部及血漿Ang-(1-7)ELISA檢測:PAH組肺組織及血漿Ang-(1-7)蛋白表達較Nor組明顯下降(P＜0.01);MPs組肺組織及血漿與Nor組相比，Ang-(1-7)蛋白表達下降(P＜0.05)，但較PAH組明顯升高(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織及血漿Ang-(1-7)蛋白表達較Nor組及MPs組均顯著下降(P＜0.01)，而較PAH組升高，

11、但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。肺組織局部及血漿Ang-Ⅱ ELISA檢測:PAH組肺組織及血漿Ang-Ⅱ蛋白表達較Nor組明顯升高(P＜0.01);MPs組肺組織及血漿與Nor組相比，Ang-Ⅱ蛋白表達升高(P＜0.05)，但較PAH組明顯減少(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織及血漿Ang-Ⅱ蛋白表達較Nor組及MPs組均明顯升高(P＜0.01)，而較PAH組下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　7.RT

12、-PCR檢測:PAH組肺組織ACE2 mRNA相對表達量較Nor組減少(P＜0.01);MPs組與Nor組相比，ACE2 mRNA相對表達量減少(P＜0.05)，但較PAH組明顯升高(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織ACE2 mRNA相對表達量較Nor組及MPs組均減少(P＜0.01)，而較PAH組升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。PAH組肺組織ACE mRNA相對表達量較Nor組升高(P＜0.01);MPs組與Nor

13、組相比，ACE mRNA相對表達量升高(P＜0.01)，但較PAH組明顯減少(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織ACE mRNA相對表達量較Nor組及MPs組均升高(P＜0.01)，而較PAH組降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　[結論]：
　　1.骨髓間充質干細胞膜微粒可降低肺動脈壓力，改善肺血管及心室重構，為肺動脈高壓治療提供一條新的可能的策略。
　　2.RAS系統(tǒng)的失衡在肺動脈高壓肺組織炎癥、