2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis,PMOP)發(fā)病率逐年增高,雌激素替代治療(estrogen replacement therapy,ERT)雖能減少絕經(jīng)后婦女的骨丟失及骨折發(fā)生率,但由于長(zhǎng)期使用可能導(dǎo)致乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的危險(xiǎn)性增加等安全問(wèn)題使其應(yīng)用受到限制。大豆苷原(daidzein,DAI)是一種常見的植物雌激素(phytoestrogen,PE),有雌激素樣效應(yīng)而無(wú)雌

2、激素樣副作用,近年來(lái)引起了人們廣泛關(guān)注。最近的研究提示植物雌激素的骨保護(hù)作用具有劑量依賴性的雙相作用特點(diǎn),其機(jī)制尚不清楚,雌激素受體(estrogen receptors,ERs)和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptors gamma,PPARγ)可能參與介導(dǎo)調(diào)節(jié)機(jī)制,但相關(guān)研究報(bào)道較少,具體作用機(jī)制也不清楚。
  第一部分大豆苷原防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的

3、量效作用及其對(duì)骨髓細(xì)胞ERs和PPARγ表達(dá)的影響
  目的:
  研究不同劑量大豆苷原對(duì)去卵巢大鼠血清E2、ALP、脂聯(lián)素(adiponectin)、瘦素(leptin),骨密度(BMD),以及對(duì)骨髓細(xì)胞ERα、ERβ和PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,探討大豆苷原防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的量效作用,及其對(duì)骨髓細(xì)胞ERs和PPARγ表達(dá)的影響。
  方法:
  將3月齡SD(Sprague Dawley

4、)雌性大鼠(由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供)隨機(jī)分為6組:假手術(shù)組(sham)、去卵巢組(行雙側(cè)卵巢切除ovariectomy,OVX)、去卵巢+戊酸雌二醇組(E2,戊酸雌二醇800μg/kg·d)、去卵巢+高劑量大豆苷原組(H-DAI,大豆苷原200 mg/kg·d)、去卵巢+中劑量大豆苷原組(M-DAI,大豆苷原50 mg/kg·d)和去卵巢+低劑量大豆苷原組(L-DAI,大豆苷原10 mg/kg·d),除假手術(shù)組外,其余大鼠均切除卵

5、巢,術(shù)后4周開始以相應(yīng)的藥物灌胃,3月后處死大鼠。取血清檢測(cè)E2、ALP、脂聯(lián)素及瘦素水平;取腰椎骨L1-5和左股骨檢測(cè)骨密度后,脫鈣行骨切片HE染色觀察骨組織形態(tài)。從右股骨骨髓腔內(nèi)提取出骨髓細(xì)胞,Realtime-RT-PCR方法檢測(cè)骨髓細(xì)胞ERα、ERβ和PPARγ mRNA表達(dá),western blot法檢測(cè)ERα、ERβ和PPARγ蛋白表達(dá)水平。
  結(jié)果:
  1、E2組和L-DAI組血清E2、ALP、adipon

6、ectin及l(fā)eptin濃度顯著高于OVX組(P<0.05);除了leptin濃度外,L-DAI組血清E2、ALP、adiponectin濃度顯著高于E2組(P<0.05)。H-DAI和M-DAI組間血清E2、ALP、adiponectin及l(fā)eptin濃度無(wú)顯著差異(P>0.05),均顯著低于E2和L-DAI組(P<0.05)。
  2、sham組大鼠的左股骨及腰椎BMD均顯著高于其他各組(P<0.05)。L-DAI組大鼠左股骨

7、及腰椎BMD均比OVX組顯著增高(P<0.05),且E2組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。M-DAI組大鼠股骨BMD顯著高于OVX組(P<0.05),與E2及L-DAI組無(wú)顯著性差異(P>0.05);M-DAI組腰椎BMD與OVX組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。H-DAI組大鼠的左股骨及腰椎BMD顯著低于L-DAI組(P<0.05),與OVX組無(wú)明顯差異(P>0.05)。
  3、大鼠左股骨及腰椎骨組織形態(tài):與sham組比較,OVX

8、組骨小梁數(shù)量顯著降低,脂肪細(xì)胞顯著增多。E2可增加骨小梁數(shù)量,減少脂肪細(xì)胞。大豆苷原三個(gè)劑量組中,L-DAI組可顯著增加骨小梁數(shù)目及抑制脂肪生成;隨著大豆苷原劑量的增加,骨小梁數(shù)量顯著遞減,脂肪細(xì)胞顯著遞增。
  4、L-DAI組大鼠骨髓細(xì)胞的ERα mRNA及蛋白表達(dá)量均顯著高于M-DAI和H-DAI組(P<0.05),較E2、OVX和sham組增高,但差異不顯著(P>0.05),各組ERβ mRNA及蛋白表達(dá)量均低于ERα表達(dá)

9、量,6組的ERβmRNA及蛋白表達(dá)水平未見明顯組間差異。H-DAI組大鼠骨髓細(xì)胞的PPARγ mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著高于M-DAI和L-DAI組(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1、大豆苷原對(duì)骨產(chǎn)生雌激素樣作用,對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥有防治作用,且呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系,低劑量時(shí)效果與雌二醇相當(dāng),高劑量時(shí)無(wú)骨保護(hù)作用。
  2、大鼠骨髓細(xì)胞均表達(dá)ERα和ERβ,但以ERα為主,提示ERα在骨保護(hù)作用中可能發(fā)揮主要作用

10、。
  3、大豆苷原三個(gè)劑量組中,低劑量組大鼠骨髓細(xì)胞ERα表達(dá)顯著高于中、高劑量組,提示低劑量大豆苷原對(duì)骨的保護(hù)作用可能是通過(guò)ERα來(lái)介導(dǎo)的。高劑量組大鼠骨髓細(xì)胞PPARγ表達(dá)顯著高于中、低劑量組,提示高劑量大豆苷原可能通過(guò)作用于PPARγ,導(dǎo)致骨量減少及骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增多。
  4、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大豆苷原低劑量時(shí)可顯著提高血清脂聯(lián)素與瘦素水平,提示脂聯(lián)素及瘦素可能參與了對(duì)骨質(zhì)疏松癥的防治作用。
  第二部分大豆苷

11、原對(duì)人類成骨細(xì)胞骨形成的量效作用及ERs/PPARγ的調(diào)節(jié)機(jī)制
  目的:
  研究不同濃度大豆苷原(daidzein,DAI)對(duì)成骨細(xì)胞骨形成的量效作用,及雌激素受體(estrogen receptors,ERs)和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)對(duì)DAI骨形成的調(diào)節(jié)作用。
  方法:
  ①以培養(yǎng)的未經(jīng)

12、處理的人類胎兒成骨細(xì)胞(human fetal osteoblast,hFOB)為對(duì)照組(Ctrl組),用17β-戊酸雌二醇(β-estradiol-17-valerate,E2)和不同濃度DAI分別處理hFOB72小時(shí)后,MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖情況,PNPP法測(cè)定成骨細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性。②用ERs拮抗劑ICI182780、ERα拮抗劑MPP、PPARγ拮抗劑GW9662分別阻斷受體ERs、ERα和PPARγ后,再給予E2及不同

13、濃度的DAI處理,MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖情況并計(jì)算細(xì)胞增殖率,PNPP法測(cè)定ALP水平。③選用高低濃度的大豆苷原分別處理hFOB后,實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)ERα、ERβ和PPARγ mRNA表達(dá)水平,western blot法檢測(cè)ERα、ERβ和PPARγ蛋白表達(dá)水平。
  結(jié)果:
  1、隨著DAI劑量的增加,成骨細(xì)胞增殖率遞減,DAI10-9mol/L組較對(duì)照組顯著升高,DAI10-5mol/L組較對(duì)照組顯著降低(

14、P<0.05)。隨著DAI劑量的增加,成骨細(xì)胞ALP水平遞減;但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  2、ICI阻滯ERs后,E2、DAI10-9mol/L、10-7mol/L、10-5 mol/L組的細(xì)胞增殖率分別為88.16%、76.30%、81.18%、83.19%,均顯著低于阻滯前(P<0.05);MPP單純阻滯ERα后,E2、DAI10-9mol/L、10-7mol/L、10-5 mol/L組的細(xì)胞增殖率分別為69.7

15、8%、63.31%、70.71%、78.43%,均顯著低于阻滯前(P<0.05)。MPP阻滯后,DAI10-9mol/L組的ALP水平顯著低于阻滯前(P<0.05)。
  3、GW阻滯PPARγ后,E2、DAI10-9mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L組的細(xì)胞增殖率分別是103.14%、96.99%、112.88%和122.22%,其中DAI10-7、10-5 mol/L組均較阻滯前顯著升高(P<0.05),D9組

16、輕度降低但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),DAI10-5 mol/L組的ALP水平較阻滯前顯著增加(P<0.05)。
  4、E2及DAI10-9mol/L組的ERα mRNA表達(dá)量無(wú)明顯差異(P>0.05),均顯著高于DAI10-5mol/L組(P<0.05)。DAI10-5mol/L組PPARγ mRNA表達(dá)量顯著高于E2組(P<0.05)。
  5、與其余各組比較,DAI10-9mol/L組ERα蛋白表達(dá)水平顯著增加

17、,DAI10-5mol/L組PPARγ蛋白表達(dá)水平明顯增加。
  6、ERβ mRNA及蛋白表達(dá)量在Ctrl、DAI10-9mol/L、DAI10-5mol/L組中均低量表達(dá),各組間均無(wú)明顯差異。
  結(jié)論:
  1、DAI的骨保護(hù)作用具有劑量依賴性的雙相作用特點(diǎn):低劑量DAI促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化,高劑量DAI抑制成骨細(xì)胞增殖和分化。
  2、低劑量DAI可能主要通過(guò)作用于ERα促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化,對(duì)PPA

18、Rγ的作用不明顯。
  3、高劑量DAI可能主要通過(guò)作用于PPARγ抑制成骨細(xì)胞增殖和分化,同時(shí)也可通過(guò)作用于ERs產(chǎn)生一定促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的作用。
  4、E2對(duì)PPARγ無(wú)作用;低劑量大豆苷原可能通過(guò)ERβ對(duì)成骨細(xì)胞增殖產(chǎn)生負(fù)性作用。
  總結(jié):
  1、大豆苷原對(duì)骨質(zhì)疏松癥有防治作用,呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系,低劑量時(shí)效果明顯,高劑量無(wú)明顯作用。
  2、低劑量大豆苷原可能主要作用于ERα,表現(xiàn)為骨生成增加

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