芍藥苷對MCAO模型大鼠的保護作用及機制研究.pdf

1、背景與目的:缺血性腦卒中是一種高發(fā)病率、高致殘率的常見病和多發(fā)病，在我國也是僅次于心肌梗死和癌癥的第三大致死原因。開發(fā)研制能治療缺血性腦卒中的藥物，是當今醫(yī)藥學(xué)術(shù)界的熱點之一。芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）是緩解腹部痙攣、鎮(zhèn)痛、改善血液循環(huán)的一種常用中藥，其主要活性成分—芍藥苷（Paeoniflorin，PF）具有潛在的解痙、防凝血和抗炎作用。研究表明，PF能夠顯著改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能，縮小腦梗死體積

2、。但是其最佳給藥方式尚無統(tǒng)一認識，其神經(jīng)保護作用的機制也鮮見報道。本文擬通過建立大鼠中動脈閉塞(Middle cerebral artery occlusion， MCAO)模型，探討PF對腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制，以期為臨床應(yīng)用PF提供新的理論依據(jù)。
　　第一部分:探討PF的給藥方式
　　方法:將72只SD雄性大鼠隨機分成假手術(shù)組（Sham）、模型組(I/R)和PF不同濃度組。采用改良longa線栓法制備大鼠大腦中

3、動脈缺血（90min）再灌注(2h)損傷模型，PF于缺血后30min腹腔注射一次給藥或缺血后30min，6h兩次給藥;假手術(shù)組和模型組給予等體積的生理鹽水。采用激光多普勒血流儀（Laster doppler flowmetry，LDF）判定MCAO模型穩(wěn)定性后，將再灌注24h后大鼠按Longa5分法標準進行神經(jīng)行為學(xué)評分，通過TTC染色測量腦梗死體積、干濕法測腦含水量，HE染色檢測缺血側(cè)海馬CA1區(qū)腦組織的形態(tài)學(xué)變化，觀察PF的腦保護作

4、用及最佳給藥濃度和給藥次數(shù)。
　　結(jié)果:PF(10mg kg-1、20mg kg-1、40mg kg-1, once)和PF(20mgkg-1，twice)給藥處理后較模型組均可減輕大鼠神經(jīng)官能缺損癥狀，減少腦梗死體積和腦含水量，改善腦組織形態(tài)學(xué)，其中PF(20mg kg-1，twice)效果最為顯著。
　　結(jié)論:PF對大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護作用，實驗應(yīng)設(shè)置PF的三個濃度梯度組:PF(5mg kg-1，twice)，P

5、F（10mg kg-1，twice）及PF(20mg kg-1，twice)，分別于缺血后30min、6h腹腔注射兩次給藥。
　　第二部分:PF對MCAO模型大鼠腦血流量變化及經(jīng)環(huán)氧酶通路表達的影響
　　方法:將90只大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、模型組(I/R)、PF低（PF5mg kg-1,twice）、中（PF10mg kg-1,twice）、高(PF20mgkg-1，twice)劑量組，尼莫地平陽性對照組(Nim

6、odipine)。采用LDF監(jiān)測給藥前后MCAO模型大鼠缺血側(cè)局部腦血流量的動態(tài)變化;免疫組化法檢測缺血側(cè)海馬CA1區(qū)COX-2的表達;ELISA法測缺血側(cè)額項皮質(zhì)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素1-β(IL-1β)、血栓素A2(TXA2)和前列腺素I2(PGI2)含量并計算PGI2/TXA2比值。旨在探討PF對大鼠局灶性腦缺血再灌注腦血流量變化及經(jīng)環(huán)氧酶通路表達的影響。
　　結(jié)果:PF較模型組能顯著增加缺血側(cè)大腦局部腦血流

7、量，降低腦缺血再灌注損傷中大鼠缺血側(cè)額頂皮質(zhì)促炎癥因子TNF-α和IL-1β含量，抑制花生四烯酸(arachidonic acid，AA)關(guān)鍵酶COX-2的陽性表達，降低經(jīng)COX代謝通路產(chǎn)物TXB2含量，增加6-keto-PGF1a含量及提高6-keto-PGF1a/TXB2比值。
　　結(jié)論:PF對腦缺血再灌注損傷大鼠的腦保護作用可能與其迅速通過血腦屏障改善缺血部血管代償能力及抑制AA的環(huán)氧酶代謝通路有關(guān)。
　　第三部分:P

8、F激活CB2受體對腦缺血神經(jīng)的保護作用
　　方法:將105只大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、模型組(I/R)、溶媒組（Vehicle）、PF（20mg kg-1，twice）劑量組，CB2R選擇性拮抗劑AM630(3mg kg-1)組、PF(20mg kg-1,twice)+AM630組、CB2R選擇性激動劑HU308(3mg kg-1)組。檢測方法同第二部分。觀察二型大麻受體(CB2R)是否參與PF的抗腦缺血神經(jīng)保護作用。