大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠骨、子宮、乳腺組織的選擇性作用及Ers-PPARγ的受體機(jī)制.pdf

1、研究背景
　　 雌激素治療能有效減少絕經(jīng)后婦女的骨丟失及骨折發(fā)生率,但同時(shí)也增加了患乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)。植物雌激素以其潛在的優(yōu)點(diǎn),成為研究的熱點(diǎn)。大豆苷原是一種常見(jiàn)的植物雌激素,具有廣泛的應(yīng)用前景。已有的研究提示植物雌激素對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥有一定的防治作用,然而也有一些研究結(jié)果不盡理想,這可能與植物雌激素對(duì)骨質(zhì)疏松癥的作用呈劑量依賴性雙相作用有關(guān),但相關(guān)研究報(bào)道較少;植物雌激素對(duì)子宮和乳腺的作用也還沒(méi)有定論。最近的研究提示

2、雌激素受體(estrogen receptors,Ers)和過(guò)氧化物酶增殖子激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptors gamma,PPARγ)可能參予其調(diào)節(jié)機(jī)制,但缺乏動(dòng)物研究數(shù)據(jù),具體作用機(jī)制也不清楚。
　　 第一部分 大豆苷原防治去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥的量效作用及其對(duì)骨組織Ers和PPARγ表達(dá)的影響
　　 目的
　　 研究不同劑量大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠骨代謝

3、生化指標(biāo)、骨密度、生物力學(xué)、骨形態(tài)學(xué)以及對(duì)骨組織Erα、Erβ和PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,探討大豆苷原防治去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥的量效作用及其分子機(jī)制。
　　 方法
　　 將4月齡大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)組(Sham)、去勢(shì)組(OVX)、去勢(shì)+戊酸雌二醇組(E2,戊酸雌二醇800μg/kg·d)、去勢(shì)+高劑量大豆苷原組(H-Dai,大豆苷原200 mg/kg·d)、去勢(shì)+中劑量大豆苷原組(M-Dai,大豆苷原

4、50 mg/kg·d)和去勢(shì)+低劑量大豆苷原組(L-Dai,大豆苷原10 mg/kg·d),除假手術(shù)組外,其余大鼠均切除卵巢,術(shù)后4周開(kāi)始以相應(yīng)的藥物灌胃,3月后處死大鼠。取血清檢測(cè)E2、Ca、P、ALP和BGP水平;取腰椎骨L1-5和左股骨檢測(cè)骨密度;取腰椎骨L3和左股骨檢測(cè)生物力學(xué);取腰椎L4做骨形態(tài)分析;以腰椎L6和右股骨提取總RNA,Realtime-RT-PCR方法檢測(cè)Erα、Erβ和PPARγ mRNA表達(dá);免疫組化檢測(cè)腰椎

5、L4與左股骨Erα、Erβ和PPARγ蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果
　　 1、L-Dai組大鼠腰椎BMD、最大壓縮載荷、骨小梁與椎體總面積比值,以及股骨BMD和最大三點(diǎn)彎曲載荷均比OVX組顯著增高,與E2組無(wú)顯著性差異;M-Dai組大鼠腰椎BMD、最大壓縮載荷、骨小梁與椎體總面積比值以及股骨BMD比OVX組顯著提高;H-Dai組大鼠只有腰椎BMD、最大壓縮載荷、骨小梁與椎體總面積比值等指標(biāo)顯著高于OVX組。
　　 2、

6、M-Dai組大鼠腰椎BMD、骨小梁與椎體總面積比值以及股骨最大三點(diǎn)彎曲載荷等指標(biāo)都顯著低于L-Dai組大鼠;H-Dai組大鼠腰椎BMD、骨小梁與椎體總面積比值,以及股骨BMD和最大三點(diǎn)彎曲載荷均顯著低于L-Dai組大鼠。
　　 3、Dai三個(gè)劑量組大鼠腰椎和股骨Erα mRNA和蛋白表達(dá)水平均與OVX組無(wú)顯著性差異。
　　 4、L-Dai和M-Dai組大鼠腰椎和股骨Erβ mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著高于OVX組,但M-

7、Dai組大鼠股骨Erβ蛋白表達(dá)水平卻顯著低于L-Dai組大鼠;H-Dai組大鼠僅腰椎Erβ mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于OVX組,股骨則與OVX組無(wú)顯著性差異,且顯著低于L-Dai組大鼠。
　　 5、Dai三個(gè)劑量組大鼠腰椎和股骨PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著低于OVX組大鼠,H-Dai組表達(dá)水平高于另外兩個(gè)劑量Dai組,但三組間差異沒(méi)有顯著性。
　　 結(jié)論
　　 1、大豆苷原對(duì)骨產(chǎn)生雌激素樣作用,對(duì)

8、去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥有防治作用,呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系,低劑量時(shí)效果與雌二醇相當(dāng),高劑量時(shí)效果呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)。
　　 2、大鼠腰椎和股骨均表達(dá)ERα和Erβ,但以ERβ為主,提示大豆苷原主要通過(guò)Erβ對(duì)骨產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　 3、大豆苷原低劑量時(shí)大鼠腰椎和股骨Erβ表達(dá)水平高,隨著劑量增加,ERβ表達(dá)水平呈下降趨勢(shì),而PPARγ表達(dá)水平則呈上升趨勢(shì),這提示Erβ和PPARγ之間可能存在一種交叉對(duì)話的關(guān)系,并且參予大豆苷原防治去

9、勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥量效作用。
　　 第二部分 大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠子宮內(nèi)膜的組織選擇性作用
　　 目的：研究不同劑量大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠子宮內(nèi)膜組織形態(tài)以及Ers和PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,探討大豆苷原對(duì)子宮內(nèi)膜的選擇性作用及其機(jī)制。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)選用第一部分實(shí)驗(yàn)大鼠的子宮組織,檢測(cè)子宮組織的病理形態(tài),以Realtime-RT-PCR檢測(cè)子宮內(nèi)膜Erα、Erβ和PPARγ mRNA表達(dá),以免疫組化

10、法檢測(cè)其蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、Dai三個(gè)劑量組大鼠子宮濕重較OVX組有所增加,但與OVX組間沒(méi)有顯著性差異,且顯著低于E2組。
　　 2、L-Dai和M-Dai組大鼠子宮內(nèi)膜腔上皮、間質(zhì)、內(nèi)膜厚度和橫切面面積與OVX組間無(wú)顯著性差異;H-Dai組大鼠子宮內(nèi)膜腔上皮、間質(zhì)和內(nèi)膜厚度較OVX組顯著性增厚,并顯著高于L-Dai組,但仍顯著低于E2組。
　　 3、H-Dai組大鼠子宮內(nèi)膜Erα mR

11、NA和蛋白表達(dá)水平均顯著高于OVX組,且顯著高于L-Dai組;L-Dai和M-Dai組則與OVX組間無(wú)顯著性差異。
　　 4、子宮內(nèi)膜Erβ mRNA僅在Sham組和E2組中檢測(cè)出,其余組未檢出;各組ERB蛋白均未檢出。
　　 5、Dai三個(gè)劑量組大鼠子宮內(nèi)膜PPARγ mRNA表達(dá)水平顯著低于OVX組,組間差異無(wú)顯著性;各組PPARγ蛋白均未檢出。
　　 結(jié)論：
　　 1、中低劑量大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠子宮

12、內(nèi)膜組織沒(méi)有雌激素樣刺激作用,而高劑量大豆苷原可能通過(guò)刺激Erα對(duì)去勢(shì)大鼠子宮內(nèi)膜發(fā)揮弱雌激素樣作用。
　　 2、大鼠子宮內(nèi)膜組織主要表達(dá)Erα。
　　 3、大鼠子宮內(nèi)膜PPARγ的作用還需要進(jìn)一步研究以明確。
　　 第三部分 大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠乳腺的組織選擇性作用
　　 目的：
　　 研究不同劑量大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠乳腺組織形態(tài)以及Ers和PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,探討大豆苷原對(duì)乳

13、腺組織的選擇性作用及其機(jī)制。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)選用第一部分實(shí)驗(yàn)大鼠的乳腺組織,檢測(cè)乳腺組織的病理形態(tài),以Realtime-RT-PCR檢測(cè)Erα、Erβ和PPARγ mRNA表達(dá),以免疫組化法檢測(cè)其蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、OVX組大鼠乳腺呈明顯的萎縮狀態(tài),Dai三個(gè)劑量組大鼠乳腺組織形態(tài)較之OVX組無(wú)明顯改變。
　　 2、Dai三個(gè)劑量組大鼠乳腺組織Erα mRNA表達(dá)水平與

14、OVX組無(wú)顯著性差異但顯著低于E2組。
　　 3、乳腺組織Erβ mRNA僅在Sham組和E2組中檢測(cè)出,其余組均未檢出。
　　 4、Dai三個(gè)劑量組大鼠乳腺組織PPARγ mRNA表達(dá)水平顯著低于OVX組,組間差異無(wú)顯著性。
　　 5、除Sham組和E2組外,各組大鼠乳腺均未見(jiàn)腺泡結(jié)構(gòu),因此Erα、Erβ和PPARγ蛋白表達(dá)均未檢出。
　　 結(jié)論：
　　 1、三個(gè)劑量大豆苷原對(duì)去勢(shì)大鼠乳腺組織均