整合素β1在CD151促HUVEC遷移增殖中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：構(gòu)建PAAV-CD151-AAA194-196突變體，三質(zhì)粒鈣磷共轉(zhuǎn)染法包裝病毒，并轉(zhuǎn)染臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，研究整合素β1在CD151基因促進(jìn)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移增殖中的機(jī)制。
　　 方法：1.質(zhì)粒的提取和鑒定；
　　 2.三質(zhì)粒鈣磷共轉(zhuǎn)染法包裝病毒，并通過(guò)斑點(diǎn)雜交法檢測(cè)重組腺相關(guān)病毒滴度；
　　 3.培養(yǎng)HUVEC，并隨機(jī)分為四組：Control組，GFP組，CD151組和QRD組。用rAAV-GFP、rAAV

2、-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196轉(zhuǎn)染HUVEC，并進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：
　　 3.1 通過(guò)SRB法檢測(cè)CD151基因?qū)δ氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響；
　　 3.2 通過(guò)細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)CD151基因?qū)δ氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響；
　　 3.3 通過(guò)Western blot 方法檢測(cè)CD151、Akt、P-Akt、PI3K及β1各蛋白在HUVEC中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組及GFP組相比

3、CD151組能明顯促進(jìn)細(xì)胞的增殖（P<0.05），而QRD組則顯著抑制細(xì)胞的增殖；與對(duì)照組及GFP組相比CD151組能明顯促進(jìn)細(xì)胞的遷移（P<0.05），而QRD組則顯著抑制細(xì)胞的遷移；CD151組和CD151-AAA194-196突變體組的CD151蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組和GFP組明顯增加，而CD151組和CD151-AAA194-196突變體組的CD151蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯差異；CD151組β1、PI3K、P-Akt蛋白表達(dá)量與對(duì)照組

4、、GFP組和QRD組相比明顯增加；而對(duì)照組、GFP組、CD151組和QRD組的總Akt蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：轉(zhuǎn)染CD151基因及其突變后都能有效的感染HUVEC并明顯促進(jìn)CD151蛋白表達(dá)，但因?yàn)镼RD組改變了CD151與整合素β1的正常結(jié)合，進(jìn)而改變了整合素與下游蛋白的相互作用，明顯降低了其生物學(xué)效應(yīng)。其分子機(jī)制為CD151與整合素β1形成復(fù)合物促進(jìn)PIK/Akt信號(hào)通路的激活，促進(jìn)HUVEC的遷移