CD151在調(diào)控血管形成中促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞粘附維持血管穩(wěn)定性的機(jī)制研究.pdf

1、目的：在以往研究CD151促進(jìn)體內(nèi)外血管形成的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討其在對(duì)皮細(xì)胞-細(xì)胞粘附連接形成及連接穩(wěn)定性維持的作用,闡明CD151促進(jìn)體外血管再生維持新生血管穩(wěn)定性的機(jī)制。
　　方法：1.將CD151、CD151-QRD突變體(整合素結(jié)合缺陷)、CD151-ARSA突變體(囊泡運(yùn)輸缺陷)和anti-CD151片斷分別插入重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并將GFP插入重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體作對(duì)照,轉(zhuǎn)染人臍靜脈

2、內(nèi)皮細(xì)胞,48小時(shí)后檢測(cè)CD151蛋白的表達(dá);2.細(xì)胞聚集實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞-細(xì)胞粘附能力;3.劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移率;4.趨化小室檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)matrigel基質(zhì)侵襲力;5.Matrigel上的管腔形成實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各研究組血管形成能力以及新生血管的穩(wěn)定性維持的差異;6.信號(hào)通路的研究,進(jìn)一步探討CD151維持內(nèi)皮細(xì)胞血管穩(wěn)定性的機(jī)制。
　　結(jié)果：1.成功轉(zhuǎn)染各組質(zhì)粒,實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因的表達(dá)調(diào)控。CD151組、QRD組、ARSA

3、組CD151蛋白的表達(dá)顯著高于GFP組和正常對(duì)照組,anti-CD151組CD151蛋白表達(dá)則顯著減少,明顯低于GFP組和正常對(duì)照組;2.CD151促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞間粘附聚集的作用顯著高于其他各組,而這一作用在QRD組、ARSA組被削弱,anti-CD151組中內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞間的粘附受到抑制,并且這一作用可被E-cadherin阻斷劑阻斷。3.CD151能夠明顯促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的定向遷移、對(duì)胞外基質(zhì)的侵襲、促進(jìn)血管再生并維持新生血管的穩(wěn)定

4、性,這些作用在QRD組、ARSA組被削弱,anti-CD151組中這一作用顯著受抑;4.CD151表達(dá)增加,下游信號(hào)分子RhoA,Rac,cdc42激活增加,FAK磷酸化增加,這一作用在CD151-QRD突變體及CD151-ARSA突變體中均被削弱。抑制CD151表達(dá),RhoA,Rac,cdc42活化被抑制,FAK磷酸化顯著減少。
　　結(jié)論：研究表明,CD151與整合素結(jié)合形成復(fù)合體,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞粘附、定向遷移和侵襲,促進(jìn)內(nèi)