臍血多能干細(xì)胞對(duì)重癥斑禿的臨床治療及相關(guān)免疫機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討臍血多能干細(xì)胞(human cord blood-derived multipotent stemcells，CB-SCs)對(duì)重癥斑禿(alopecia areata，AA)的臨床治療作用，并初步評(píng)估其療效;其次評(píng)估其對(duì)自身免疫的調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　1.使用臍血多能干細(xì)胞治療9例嚴(yán)重的斑禿患者。分離出的臍血多能干細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到一個(gè)由9層培養(yǎng)皿組成的干細(xì)胞教育器(Stem CellEducator)中，在37℃，8

2、％CO2的條件下在含有1640和7％胎牛血清的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，待80％-90％的細(xì)胞匯合后進(jìn)行治療。干細(xì)胞教育器是一個(gè)閉合的回路系統(tǒng)，使用帶有16號(hào)Ⅳ型針頭的采血袋，連接血細(xì)胞采集儀進(jìn)行肘正中靜脈采血，同時(shí)采出的全血經(jīng)過血細(xì)胞采集儀分離出患者的淋巴細(xì)胞，收集到的淋巴細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到教育器中與臍血多能干細(xì)胞共同培養(yǎng)，其它的血液成分自動(dòng)地回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。經(jīng)過教育的淋巴細(xì)胞與生理鹽水通過患者的手背靜脈回輸?shù)襟w內(nèi)。臍血多能干細(xì)胞緊緊地黏附于教育器

3、的內(nèi)表面，所以僅是經(jīng)受臍血多能干細(xì)胞教育的自體淋巴細(xì)胞被回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。整個(gè)過程大概需要8-9個(gè)小時(shí)。隨訪觀察1、3、6、9和12個(gè)月患者毛發(fā)再生的情況，并進(jìn)行拍照做治療前和治療后的對(duì)比。
　　2.9例患者在治療前和治療后1個(gè)月時(shí)采集外周靜脈血，用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)IL-4、IL-13、IL-17A、TNF-α、TGF-β1、IL-5、IL-12和FoxP3的表達(dá)水平，以及CD28和ICOS-CD278的表達(dá)水平。
　　3.

4、9例患者在治療前和治療后3個(gè)月時(shí)行頭皮病理組織活檢，使用石蠟切片做HE染色，使用冰凍切片做直接免疫熒光染色，染色抗體分別為TGF-β1、CD14、CD11b、CD83、DEC205和FoxP3。
　　結(jié)果:
　　1.臨床治愈有2例，其中全禿1例，斑禿1例。顯效1例，為普禿患者在治療后3個(gè)月時(shí)有80％以上的頭發(fā)長(zhǎng)出，同時(shí)眉毛和胡須也長(zhǎng)出。好轉(zhuǎn)5例，其中普禿1例，為自1歲時(shí)出現(xiàn)脫發(fā)的17歲的患者，在治療后3個(gè)月時(shí)其眉毛和胡須出現(xiàn)

5、再生。斑禿1例，在治療后3個(gè)月時(shí)其雙手十指甲板上小凹明顯減少變淺。無效1例，為普禿患者對(duì)此治療沒有反應(yīng)。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明斑禿患者在接受治療后，IL-4(P＜0.05)和IL-5（P＜0.05）在治療后出現(xiàn)了升高，IL-13(P＞0.05)雖然無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在治療后也有升高的趨勢(shì)。故患者表現(xiàn)出了Th2細(xì)胞因子的上調(diào)（如:IL-4、IL-5、IL-13）。IL-12(P＞0.05)無明顯變化。TGF-β1(P＜0.05)

6、在治療后1個(gè)月時(shí)有顯著增高。FoxP3(P＞0.05)的百分比無明顯變化。CD28（P＜0.05）的表達(dá)明顯升高，但是ICOS(P＞0.05)的水平?jīng)]有明顯變化。
　　3.HE染色，治療前鏡下觀察可見毛囊及皮脂腺周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見少量嗜酸性粒細(xì)胞。治療后3個(gè)月時(shí)鏡下觀察頭皮HE染色切片，可見毛囊及皮脂腺周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)基本消失。
　　4.直接免疫熒光測(cè)定表明TGF-β1在治療后表達(dá)增強(qiáng)，其在毛囊周圍形成“TGF-β1

7、環(huán)”。為了說明TGF-β1產(chǎn)生的源頭，我們做了雙染，通過使用單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞（CD14和CD11b）、朗格漢斯細(xì)胞(CD83和DEC205)和Treg T細(xì)胞(FoxP3)的表面標(biāo)記，僅有一部分CD14+的單核細(xì)胞/CD11b+的巨噬細(xì)胞和FoxP3+的Treg細(xì)胞移行進(jìn)入到了真皮內(nèi)產(chǎn)生TGF-β1，我們發(fā)現(xiàn)治療后在毛囊的角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)有TGF-β1的強(qiáng)表達(dá)。CD83和DEC205在治療前后均無表達(dá)。
　　結(jié)論:臍血多能干細(xì)胞對(duì)